Belastungsinduzierte Veränderungen von Thrombozyten ...

Zusammenfassung
In Folge des Laufbandstufentests kam es in der Auswertung von CD62P und PAC-1 zu einem
minimalen, aber signifikanten Anstieg der Thrombozytenaktivität in den unfixierten und
nachträglich fixierten Proben. Nach der direkten Fixierung waren die Aktivitätsunterschiede
nicht mehr messbar, da der Einfluss der Belastungsintervention durch die Fixierungswirkung
vollständig überlagert wurde. Nach dem Fahrradstufentest konnte eine signifikante Zunahme
der Thrombozytenaktivität nur für PAC-1 nicht aber für CD62P gefunden werden.
Nach moderater Stimulation mit TRAP-6 und ADP fand sich jeweils eine signifikante
Zunahme der Reaktivität der Thrombozyten (CD62P, PAC-1). Hingegen waren nach starker
Stimulation keine Unterschiede mehr nachweisbar und es darf gefolgert werden, dass in Folge
der Stufentests in erster Linie die Reaktivität der vorhandenen Thrombozytenpopulation
erhöht wird und nicht vermehrt reaktivere Thrombozyten ausgeschüttet werden. Gleichzeitig
fand sich nach dem Laufbandstufentest ein signifikanter Anstieg von löslichem P-Selektin im
Plasma und es stellte sich die Frage, warum angesichts der erreichten Ausbelastung nur ein so
geringer Anstieg von aktivierten Thrombozyten gemessen werden konnte.
Unter der Vorstellung, dass singuläre aktivierte Thrombozyten zügig aus der Zirkulation
entfernt werden aber auch die Fähigkeit zur Adhäsion an Leukozyten besitzen, erfolgte in
Teilstudie II erstmalig die Messung von Thrombozyten-Leukozyten Konjugaten. Obwohl
nach der submaximalen Dauerbelastung keine messbare Veränderung der Thromboyztenakti-
vität (CD62P) gefunden werden konnte, so ergab sich dennoch ein hochsignifikanter Anstieg
an Konjugaten. Ebenso fand sich eine klare Zunahme der Reaktivität (CD62P).
In Teilstudie III wurde die Methodik der Messung von Konjugaten zu einer 3-Farben-Analyse
mit dem Ziel einer Differenzierung von Leukozytensubpopulationen ausgebaut. Die Auswahl
der hochintensiven Kurzzeitbelastung erfolgte vor der Fragestellung, ob sich durch einen
maximal intensiven Reiz eine Zunahme der Thrombozytenaktivität provozieren lässt. Erneut
konnte keine Zunahme der Thrombozytenaktivität (CD62P) gefunden werden. Dies wurde
durch die Messung von CD63, einem eigenständigen Aktivierungsmarker, bestätigt. Wiederum
ergab sich eine signifikante Zunahme der Thrombozytenreaktivität (CD41, CD62P) und
der Bildung von Konjugaten. Dabei besaßen Monozyten die stärkste, Granulozyten eine
mittlere und Lymphozyten die geringste Neigung zur Konjugatbildung.
Die Durchflusszytometrie bietet eine hochsensitive Methode, auch kleine Veränderungen der
Aktivität und Reaktivität von Thrombozyten auf Einzelzellebene bei gleichzeitiger Erfassung
einer großen Zellzahl zu untersuchen. Die Verwendung von Vollblut beugt durch den
Verzicht auf Zentrifugations- oder Waschschritte einem Zellverlust vor und wirkt durch eine
Reduktion der Probenmanipulation einer artifiziellen Aktivierung der Thrombozyten ex vivo
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