Experimentelle Untersuchungen zur Transgenese bei Nutztieren

Befunde wurden nach Injektion des tTA-Plasmids in die Skelettmuskulatur gemacht. Dagegen
konnte in Mitogen-stimulierten Lymphozyten die Expression von hCD59 und hDAF
eindeutig gezeigt werden (Kues et al., 2006a).
Durch Fütterung mit Doxycyclin war die Expression in den Muskelfasern abgestellbar. Durch
Resequenzierung der Konstrukte aus genomischer DNA der transgenen Tiere, konnte
ausgeschlossen werden, dass die beobachteteten Expressionsmuster durch Deletion von
regulativen Sequenzen hervorgerufen wurden.
Ansätze, die transgenen Linien auf Transgen-Homozygotie zu verpaaren, waren nicht
erfolgreich. Offenbar aufgrund eines bereits hohen Inzuchtgrades im vorhandenen Bestand
führten Geschwisterverpaarungen zu sehr kleinen Würfen (0-3 Ferkel) mit lebensschwachen
Ferkeln. Daher wurden Tiere aus Linien mit NTA-CD59 und NTA-DAF-Transgenen
verpaart. In den normal großen Würfen wurden in etwa die erwarteten Verhältnisse von 25 %
Nachkommen mit beiden Kassetten, 50% mit einer Kassette und 25% Wildtyp gefunden
(Kues et al., 2006a). Bei Tieren mit zwei NTA-Kassetten wurde linien-abhängig die
Hochregulation von einer oder beider Kassetten gefunden (Tab. 3; Kues et al., 2006a;
Niemann und Kues, 2007). Dabei kam es einer Ausweitung der exprimierenden Zellen, so
wurden regelmäßig bis zu 100 % positive Skelettmuskelfasern gefunden, und in zahlreichen
anderen Organen, wie Leber, Haut, Herz und Niere lagen positive Zellen vor (Abb. 15A, C).
In den NTA-doppelttransgenen Tieren wurde eine Doxycyclin-abhängige Transgenexpression
gefunden (Abb. 16). Nach oraler Applikation von 3.3 mg Doxycyclin pro kg Lebendgewicht
und Tag wurde bereits nach 2 Tagen eine massive Reduktion der bicistronischen Transkripte
gefunden. In Abb. 16 wurden von drei doppelt-transgenen Geschwistertieren eines mit einem
Placebo und zwei mit Doxycyclin gefüttert. Die gewählte Doxycyclin-Dosis von 3.3 mg/
Kilogramm Lebendgewicht und Tag wurde aufgrund der Literaturangaben für die
Doxycyclin-Transgenregulation bei Mäusen (Furth et al., 1994; Kistner et al., 1996; Zhu et
al., 2001) extrapoliert; sie liegt deutlich unter der für Schweine empfohlenen antimikrobiell
wirksamen Dosis von 12 mg/kg und Tag. Die Transgenexpression in transgenen Schweinen
blieb nach dem Absetzen der Doxycyclin-Gabe für mindestens 50 Tage abgeschaltet, bevor
eine Reexpression messbar ist (Abb. 16). Eine mögliche Erklärung ist, dass Doxycyclin
offenbar effektiv in Knochen zwischengespeichert und dann zeitverzögert in den Kreislauf
zurückgeführt werden kann (Stepensky et al., 2003). In transgenen Mäusen wurden
unterschiedliche Wirksamkeiten von Doxycyclin in Abhängigkeit vom Mausstamm
beschrieben (Robertson et al., 2002). In nachfolgenden Dosis-Wirksamkeitsuntersuchungen
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