Evaluación de la inmunogenicidad y la capacidad protectora de la ...

Materiales y métodos3.10.3 Determinación de los niveles de anticuerpos anti-proteinasa p-62 en sueros ysecreciones vaginales de ratones BALB/c.Previa a la inmunización, diez días después de la última inmunización y ocho días posterioral reto con T. vaginalis se les extrajo sangre y se les realizaron lavados vaginales a losratones, para determinar los niveles de IgG1, IgG2a, IgG2b e IgG3 en sueros y de IgG eIgA en secreciones vaginales por ELISA.Brevemente, las placas de 96 pocillos (Maxisorp, Nunc, Dinamarca) fueron recubiertas con100 L por pozo de la proteinasa de T. vaginalis (20 g/mL diluida en tampón derecubrimiento) e incubadas a 4 o C en cámara húmeda por 16 horas, se continuó según fuedescrito en el acápite 3.4.1.2. Previamente, se seleccionaron las condiciones óptimas detrabajo. Los sueros y lavados vaginales fueron utilizados a la dilución de 1/5000 y 1/3 enTFS pH 7,4 conteniendo BSA al 1 %, respectivamente. Se utilizaron los conjugados anti-IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3 de ratón – peroxidasa para la evaluación de los sueros y anti-IgG e IgA de ratón – peroxidasa para los exudados vaginales, todos a la dilución de 1/5000.3.11 Análisis de los resultados.Para determinar el efecto producido por los AcMs sobre la adhesión del parásito a célulasepiteliales, se compararon los porcientos de inhibición obtenidos con cada uno de ellos.Para determinar el AcM que más protegió, se compararon los porcientos de protección delos grupos en estudio. En ambos ensayos, se aplicó la prueba de “Comparación deproporciones” empleando los paquetes de programas para análisis estadísticos Statistica6.0.Las concentraciones de nitrito se compararon tanto en el sobrenadante del cultivo demacrófagos como en el suero de ratones, ambos tratados con los AcMs en presencia delparásito, ademàs se compararon los resultados de la inmunización intranasal de ratonesBALB/c con la proteinasa-62 y los adyuvantes y los controles. En todos los casos se aplicó63