Evaluación de la inmunogenicidad y la capacidad protectora de la ...

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MME.......................medio mínimo esencialNaIO 4.................................. metaperiodato de sodioONS ........................óxido nítrico sintasaPCR.........................Reacción en cadena de la polimerasa (del inglés, Polymerase ChainReaction)PM...........................peso molecularPMSF ......................fluoruro de fenilmetilsulfoniloPVH ........................papilomavirusp-62 .........................proteinasa de peso molecular de 62 kDaSDS-PAGE .............electroforesis en geles de poliacrilamida en presencia de duodecilsulfato de sodio (del inglés, sodium dodecyl sulfate polyacrilamide gelelectrophoresis)TCA ........................ácido tricloacéticoTFS..........................tampón fosfato salinoTFS-T......................TFS - Tween 20[ 3 H]-timidina...........timidina tritiadaTLCK......................Np-tosil-lisina clorometilcetonaTC ...........................toxina coléricaVIH .........................virus de la inmunodeficiencia humana
SÍNTESISTrichomonas vaginalis, el agente etiológico de la trichomonosis humana, es un protozooparásito que infecta el tracto urogenital produciendo la más común de las enfermedades detransmisión sexual. Estudios previos demostraron que la vacunación subcutánea con variasdosis de extracto total de T. vaginalis con adyuvantes completo e incompleto de Freundprotege parcialmente contra el reto por vía vaginal. Por otra parte, se ha encontradorespuesta inmune protectora contra otros parásitos utilizando proteinasas nativas orecombinantes. Sin embargo, no existen estudios acerca de la utilización de una proteinasade T. vaginalis como posible inmunógeno. T. vaginalis posee altos niveles de actividadproteolítica, fundamentalmente del tipo cisteino-proteinasas. Esta actividad es necesariapara el reconocimiento y adhesión del parásito a la superficie de las células epiteliales delhospedero. Algunos estudios han determinado el papel que tienen las cisteino-proteinasasde 30, 65 y 39 kDa en el establecimiento de la infección, mientras otros autores ya habíansugerido, la posible participación que pudiera tener la proteinasa de 60 kDa en la patogeniaproducida por el parásito. Con vista a buscar un inmunógeno contra Trichomonasvaginalis, se procedió a purificar la proteinasa de 60 KDa descrita por Garber y Lemchuk-Favel, en 1989 utilizando un procedimiento similar al planteado por estos autores, conmodificaciones y se obtuvo una proteinasa de peso molecular de 62 kDa. Sobre la base deeste conocimiento, nos propusimos determinar si la proteinasa de peso molecular de 62 kDasecretada por el parásito, puede constituir una diana adecuada para evitar la infección porT. vaginalis en un modelo experimental.Los resultados más relevantes obtenidos en este trabajo fueron los siguientes:- Se demostró por primera vez que la proteinasa de 62 kDa es importante en lacitoadherencia del parásito a células epiteliales, paso inicial en el establecimiento de lainfección con T. vaginalis.- Los anticuerpos monoclonales 4D8 y 1A8 contra la proteinasa de 62 kDa protegen aratones BALB/c ante el reto intraperitoneal con T. vaginalis por un mecanismo decitotoxicidad facilitado por anticuerpos monoclonales en presencia de macrófagos ymediado por óxido nítrico.- Los anticuerpos monoclonales 4D8 y 1A8 reconocen epitopos diferentes, ambos denaturaleza proteica y repetitivos sobre la proteinasa de 62 kDa.- La proteinasa de 62 kDa administrada por vía intranasal utilizando como adyuvantestoxina colérica y CpG (oligonucléotidos CpG no metilados), protege a ratones BALB/ccontra un reto intravaginal.- Los niveles de IgA alcanzados en la vagina de ratones BALB/c, posterior a lainmunización con la proteinasa de 62 kDa con adyuvantes, pueden ser importantes en larespuesta inmune protectora contra T. vaginalis.
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8-REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICASAbraha
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Dalton JP, Brindley PJ, Knox DP, Br
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Garber GE, Lemchuk-Favel LT, Bowie
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Huppert JS, Batteiger BE, Braslins
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Lopes JD, Da-Mota GF, Carneiro CR,
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Nogal-Ruiz JJ, Gomez-Barrio A, Esca
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Sayed el-Ahl SA, el-Wakll HS, Kamel
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Vargas-Villarreal J, Mata-Cardenas
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