TC BALIKES R ÜN VERS TES FEN BL MLER ENST TÜSÜ B YOLOJ ...
TC BALIKES R ÜN VERS TES FEN BL MLER ENST TÜSÜ B YOLOJ ...
TC BALIKES R ÜN VERS TES FEN BL MLER ENST TÜSÜ B YOLOJ ...
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
çift kuvvet Mueller Hinton Broth (MHB) içersinde 37 o C’de 24 saat inkübe<br />
edilmiştir. 24 saatlik inkübasyonun sonunda gelişen mikroorganizmalar bulundukları<br />
tüpten alınarak Mc Farland No:0,5’e (yaklaşık 10 8 CFU/ml) göre bulanıklık ayarı<br />
yapılmıştır. Test edilecek uçucu yağlar, her birinden 4 mg olmak üzere ayrı ayrı<br />
steril tüplere tartılmış ve üzerlerine 2’şer ml saf Dimetil sülfoksit (DMSO) eklenerek<br />
tamamen çözünmeleri, homojen bir karışım haline gelmeleri sağlanmıştır (stok<br />
çözelti). Mc Farland No:0,5’e göre ayarlanan taze mikroorganizma<br />
süspansiyonlarından uygun besiyerlerine yayma ekim yapıldı ve üzerilerine her<br />
birine stok çözeltiden 20 µl emdirilen 3 adet ve 20 µl standart kloramfenikol<br />
(Candida albicans için ketokonozol) emdirilen 1 adet 6 mm çapında steril kağıt<br />
diskler uygun aralıklarla yerleştirildı. Bu şekilde hazırlanan petri kapları her bir<br />
mikroorganizma için uygun inkübasyon sıcaklığında 24 saat inkübe edildi.<br />
2.2.2.2 Mikrobroth Dilüsyon Metodu<br />
Çalışmada kullanılan mikroorganizmalardan Listeria monocytogenes,<br />
Buffered Listeria Enrichment Broth Base (<strong>BL</strong>EB) içersinde 35 o C’de, Candida<br />
albicans, Saboraud Dextrose Broth (SDB) içersinde 37<br />
45<br />
o C’de ve diğer<br />
mikroorganizmalarda çift kuvvet Mueller Hinton Broth (MHB) içersinde 37 o C’de 24<br />
saat inkübe edilmiştir. İnkübasyon sonrasında gelişen kültürler, Mc Farland<br />
No: 0,5 ’e (yaklaşık 10 8 CFU/ml) göre bulanıklık ayarı yapılmıştır. Test edilecek<br />
uçucu yağlar, her birinden 4 mg olmak üzere ayrı ayrı steril tüplerde tartılmış ve<br />
2 ’şer ml steril saf Dimetil Sülfoksit (DMSO) eklenerek çözülmeleri ve homojen bir<br />
karışım haline gelmeleri sağlanmıştır. Stok çözelti denemeler için 96 “U” tipi<br />
kuyucuklara sahip mikrodilüsyon petrileri (96 Well Plate) kullanılmıştır. Mikropipet<br />
yardımıyla kuyucuklara önce 100 ’er µl steril distile su ilave edilmiştir (1, 11, 12’inci<br />
sütunlar hariç). Daha sonra ilk sütundaki kuyucukların her birine hazırlanan stok<br />
çözeltilerden 200 ’er µl konulmuştur. Bu sütundan alınan 100 µl ’lik kısımlar ikinci<br />
sütuna transfer edilmiş ve bu şekilde seri olarak yapılan dilüsyonlar ile stok<br />
solüsyonların seyreltilmeleri sağlanmıştır. Yalnızca mikroorganizmasız<br />
antimikrobiyal ajanların seri dilüsyonlarını içeren sondan bir önceki sütun (11 ’inci<br />
sütun) negatif kontrol olarak kullanılmıştır. Son sütun ise pozitif kontrol olarak
Change language