Methodenskript

Methodenskript AG Cypionka - 11 -
Eichkurve aufnehmen im Bereich bis 2 µmol/Ansatz
Dieser Test kann auch qualitativ zur Überprüfung der Sulfidbildung in Bakterienkulturen verwendet
werden. Auch ohne Rührung und Photometer zeigt das kolloidal ausfallende Kupfersulfid eine
kräftig braune Färbung.
Turbidometrische Bestimmung von anorganischem Sulfat (nach Cypionka und
Pfennig, Tabatabai)
Reagentien:
A) 10 g Citronensäure * H 2 O, H 2 O ad 80 ml, lösen und mit 120 ml Glycerin (99.5%) mischen.
B) 0.5 g BaCl 2 * 2 H 2 O, 5 g Citronensäure * H 2 O, H 2 O ad 50 ml.
Vorgehen:
2 ml Probe (wenn nötig, klarzentrifugiert) mit 2 ml Lösung A schlierenfrei mischen. 0.5 ml Lösung
B zusetzen und sofort schlierenfrei mischen. Nach 30 - 45 Minuten erneut mischen und die
Trübung bei 436 nm gegen sulfatfreie Kontrolle messen. Immer Doppelbestimmungen mit verschieden
verdünnten Proben durchführen! Stets Eichstandards über den erwarteten Konzentrationsbereich
der Proben mitmessen!
Eichkurve im Bereich von 0.1 - 5.0 µmol Sulfat pro Testansatz anlegen. Für die Erstellung der
Tiefenprofile werden die von Sulfid und Partikeln befreiten Wasserproben (1 l) verwendet.
Prinzip der Reaktion: Ba 2+ + SO 4 2- → BaSO 4 (unlöslich)
Citronensäure säuert den Ansatz an und komplexiert die Ba 2+ -Ionen. Aus den Komplexen entstehen
bei der Reaktion mit Sulfat sehr kleine Kristalle mit hoher optischer Dichte. Glycerin verlangsamt
die Sedimentation der Kristalle.
Sulfat-Schnelltest mit 0.2 M HCl und 0.2 M BaCl 2
1 ml Kultur mit 2 Tropfen HCl ansäuern, umschütteln, 2 Tropfen BaCl 2 zusetzen. Sofortige
Trübung zeigt Sulfat, langsam auftretende evtl. Thiosulfat (=> Schwefel) an.
Photometrische Analyse von Thionaten (nach Kelly et al. 1969; Fitz und Cypionka 1990)
Der photometrische Nachweis von Thiosulfat, Trithionat und Tetrathionat beruht auf der alkalischen
Cyanolyse der Thionate, die zu Thiocyanatäquivalenten umgesetzt werden. Zur Unterscheidung
der Thionate wird die Cyanolyse-Reaktion bei verschiedenen Temperaturen und zum Teil
mit CuSO 4 als Katalysator durchgeführt. Die dabei entstehenden Thiocyanate können dann als rotbrauner
Komplex mit Eisen (III) photometrisch quantifiziert werden.