Methodenskript

Methodenskript AG Cypionka - 23 -
Geißelfärbung (nach Ryu)
Zunächst wird ein mikroskopisches Präparat einer Bakteriensuspension hergestellt. Sobald der
Großteil der Zellen angeheftet ist, wird die Färbelösung zu dem Präparat gegeben. Nach einer
Einwirkzeit von 5-15 min sollten die Geißeln sichtbar sein.
Lösung I: 5%-ige Phenollösung 10 ml
Tanninsäure
2 g
AlK(SO 4 ) 2 x 12 H 2 O, ges. Lösung
10 ml
Lösung II: ges. Lösung Kristallviolett (12 g/100 ml MeOH)
Färbelösung: Lsg.I : Lsg.II = 10 : 1
Katalase-Test
Reagenz: 5%ige H 2 O 2 -Lösung, aus 30%iger durch Verdünnen mit dest. H 2 O herstellen. Kühl
und dunkel lagern. Nicht mit den Händen berühren. Verunreinigungen (Staub, Metalle etc.) bewirken
Zersetzung; daher sauber handhaben.
Vorgehen:
Mit Impföse Bakterienmasse, möglichst aus dem Zentrum einer frischen Kolonie entnehmen und
auf einen sauberen Objektträger geben. Einen Tropfen der verdünnten H 2 O 2 -Lösung mit sauberer
Pasteur-Pipette darübergeben. Gasentwicklung (O 2 ) zeigt Katalase an. H 2 O 2 nicht direkt auf
dieAgarplatte geben, da sonst die Bakterien abgetötet und nicht mehr für weitere Überimpfungen
verwendet werden können!
Oxidase-Test
Reagenz:
H 2 O
Ascorbinsäure
Tetramethyl-p-phenylendiamin-HCl
100 ml
0.1 g
1.0 g
Vorsicht, carcinogen! Reagenz (wird gestellt, täglich frisch ansetzen!) nicht mit Händen berühren
und nichts verschütten! Benutzte Gefäße und Pipetten nicht liegen lassen, sondern gleich gut spülen!
Vorgehen:
Schmale Filterpapierstreifen (Cellulose) mit einigen Tropfen Reagenz tränken (nicht zu nass!).
Bakterienmasse aus einer Kolonie mit einer Impföse auf den Papierstreifen geben und (evtl. mit
abgerundetem Glasstab) verreiben. Blaufärbung zeigt Oxidaseaktivität. Vergleichspräparat mit E.
coli.