Methodenskript

Methodenskript AG Cypionka - 25 -
Aufnahme von Wachstumskurven
Wichtigster Parameter der Wachstumsversuche sind die Erträge pro umgesetzten Substrat. Diese
werden als Trockenmasse und Zellzahl dargetellt. Die Wachstumsrate einer Bakterienkultur wird
aus der Messung der optischen Dichte bestimmt. Diese wird mit dem Ratio/XR Turbidimeter von
HACH (Labor 2) gemessen. Um die OD auf Zelzahlen umrechnen zu können, wir an verdünnten
Proben die Zellzahl pro OD ermittelt. Gleichung zur Bestimmung der Wachstumsrate:
ln( x)
− ln( x0)
µ =
( t − t )
0
µ = Wachstumsrate (h -1 )
x = OD (aktueller Zeitpunkt)
x 0 = OD (zu Beginn des exponentiellen Wachstums)
t – t 0 = betrachteter Zeitraum (h)
Lithotrophes Wachstum soll mit den folgenden Substraten getestet werden.
Serumflaschen:
Gradientenröhrchen:
H 2 /O 2 (70/30, v/v), S 2 O 3 2- (5 mM)/ Luft, H 2 (100 %)/NO 3 - (10 mM)
HS - /O 2 (Stichkultur)
Schraubdeckelröhrchen: HS - (1 mM)/NO 3 - (10 mM), S 2 O 3 2- (5 mM)/NO 3 - (10 mM)
Bestimmung der b-Glucosidase-Aktivität
Die β-Glucosidase (= Cellulase) hydrolysiert die β(1,4)-glucosidische Bindung zwischen den Glucoseeinheiten
der Cellulose.
Testprinzip
Die in der Probe enthaltenen β-Glucosidasen hydrolysieren das nicht fluoreszierende Substratanalogon 4-
Methylumbelliferyl-β-D-Glucosid. Das abgespaltene 4-Methylumbelliferon wird fluorimetrisch gemessen.
CH 3
CH 3
HOH 2 C
O
HOH 2 C
O
β-Glucosidase
+
HO
OH
HO
O
O
O
HO O O
HO
OH
HO
OH
4-Methylumbelliferyl-β-D-Glucosid
4-Methylumbelliferon
β-D-Glucose