Methodenskript

Methodenskript AG Cypionka - 3 -
Herstellung von Wachstumsmedien
Die Wachstumsmedien werden in speziell dafür angefertigten Glasgefäßen nach WIDDEL (1980,
Abb. 1) zubereitet. Die Chemikalien wurden in angegebener Reihenfolge (siehe Tabellen) eingewogen
und unter Rühren gelöst. Die Abfüllglocke wird in Filztuch und Alufolie eingewickelt, der
Gasansatzstutzen mit dem Wattefilter mit einem Gummistopfen verschlossen. Die seitlichen
Schraubverschlüsse werden ebenfalls verschlossen, allerdings wird während des Autoklavierens
ein seitlicher Schraubverschluß um etwa eine halbe Umdrehung geöffnet, um ein Zerplatzen des
Gefäßes durch Überdruck zu verhindern. Das Medium wird 50 min bei 121°C autoklaviert.
Abb. 1: Glaskolben zur Herstellung Medium für Anaerobier (nach WIDDEL 1980).
Nach dem Autoklavieren werden Supplementlösungen im Gasgegenstrom durch einen seitlichen
Stutzen zugegeben.
Oxische Medien:
Nach dem Autoklavieren werden die seitlichen Schraubverschlüsse dicht verschlossen und der
Gummistopfen aus dem Gasansatzstutzen entfernt. Luft kann jetzt nur durch den Wattefilter in
den Kolben eindringen. Um dem abgekühlten Medium die Supplementlösungen zugeben zu können
wird der Kolben an N 2 angeschlossen 5 kPa. Der Kolben mit dem fertigen Medium bleibt am
Stickstoff angeschlossen, da der Gasüberdruck zum Abfüllen benötigt wird. Das fertige Medium
wird unter der Abfüllglocke in sterile Röhrchen oder Flaschen abgefüllt.
Anoxische Medien:
Nach dem Autoklavieren wird der Gasraum über dem Medium kurz mit N 2 /CO 2 (80/20, v/v) mit
N 2 gespült, die Schraubverschlüsse dicht verschlossen und das Medium unter Rühren bei 5 kPa
unter N 2 /CO 2 (80/20, v/v) abgekühlt. Dem abgekühltem Medium wurden aseptisch im Gasgegenstrom
die Supplementlösungen zugegeben. Der pH-Wert der Medien wurde (falls notwendig) mit
steriler 1 N Na 2 CO 3 oder 1 N HCl auf 7.2 - 7.4 eingestellt. Das fertige Medium wird unter der
Abfüllglocke in sterile Röhrchen oder Flaschen abgefüllt.