SS 2005 BIOCHEMISCHE ARBEITSMETHODEN für Biologen ...

1.2.5 Dialyse
• der Dialyseschlauch (ca. 30 cm; ∅ ca. 1,6 cm, Porengröße 12-14 kD) liegt eingeweicht in
Ethanol vor und muss vor Verwendung gründlich mit Wasser gewaschen werden (Schlauch
nur mit Handschuhen anfassen!)
• anschließend wird ein Ende mit 2 Knoten verschlossen, der Enzymextrakt (E) eingefüllt und
auch das andere Ende verknotet
• der Dialyseschlauch wird in 2L eiskalte Pufferlösung oder dest. H2O eingehängt
• es wird über Nacht auf einem Magnetrührer (Kühlraum) langsam gerührt
• der Dialyseschlauch wird vorsichtig geöffnet, das Dialysat im Messzylinder aufgefangen und
das Volumen bestimmt; dieser entsalzte Enzymextrakt (EE) kann auf die
Anionenaustauschersäule aufgetragen werden (Probe von EE nehmen).
Aktivitätstests und Proteinbestimmung erfolgen wie in Kap. 1.5 und Kap. 1.6 beschrieben.
1.3 ÄKTAprime: Ein Gerät für die FPLC (Fast Protein Liquid
Chromoatography)
ÄKTAprime: Ein Gerät für die FPLC (Fast Protein Liquid Chromoatography)
FPLC-Anlagen bestehen aus Pumpen, Ventilen und Messsonden. Mit ihrer Hilfe werden
Pufferlösungen und flüssige Proben (mobile Phase) über die in Glassäulen gepackten
Chromatographiematrices (stationäre Phase) geleitet. Die Maschine dient zur Automatisierung des
Prozesses. Im folgenden werden grundlegende Prinzipien der FPLC am Beispiel des Flusspfades der
ÄKTAprime erklärt.
Abb. 1.3.1 Aufbau der FPLC-Anlage ÄKTAprime (Amersham/GE Healthcare)
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