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SS 2005 BIOCHEMISCHE ARBEITSMETHODEN für Biologen ...

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Wasser von der Geloberfläche mit einem Whatman Filterpapier absaugen, dabei nicht die<br />

Geloberfläche berühren. Sammelgellösung zwischen die Platten pipettieren; Kamm einsetzen<br />

(Luftblasen vermeiden). Nach 30-45 Minuten ist das Gel polymerisiert. Kamm langsam aus dem Gel<br />

ziehen. Die Geltaschen von restlichem unpolymerisierten Acrylamid durch Spülen mit Laufpuffer<br />

befreien. Gel in die Kammer einbauen und 5-10-µl Proben auftragen. Jede Probe zweimal auftragen<br />

(siehe Schema). Gellauf: 40 mA konstant. Lauf dauert etwa 45 min.<br />

M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 M 1 2 3 4 5 6 7 8 9<br />

Coomassie Färbung Western Blot<br />

M= Marker Proteine (Molekulargewichtsstandard)<br />

Ein Gel direkt färben mit Coomassie Blue. Das andere Gel wird <strong>für</strong> den Western Blot benötigt .<br />

Stock Lösungen<br />

1. Acrylamid/bis (30 % T, 2.6 % C)<br />

87.6 g Acrylamid<br />

2.4 g N’N’-bis-methylene-Acrylamid<br />

auf 300 mL mit H2O dest. auffüllen. Filtrieren und bei 4 ˚C dunkel lagern. Achtung Acrylamid ist im<br />

unpolymersierten Zustand ein Nervengift und ist cancerogen!!!<br />

(Es wird eine gebrauchsfertige Acrylamidlösung bereitgestellt)<br />

2. 1.5 M Tris-HCl, pH 8.8<br />

18.15 g Tris<br />

50 mL H2O dest.<br />

Mit HCl auf pH 8.8 bringen, auf 100 mL auffüllen mit H2O dest. und bei 4 o C lagern.<br />

3. 1 M Tris-HCl, pH 6.8<br />

12g Tris<br />

60 mL H2O dest.<br />

Mit HCl auf pH 6.8 bringen, auf 100 mL auffüllen mit H2O dest. und bei 4 o C lagern.<br />

4. 10% APS Lösung.<br />

Dazu 1 g Ammoniumpersulfat/10 mL Aqua bist. ansetzen. Für 2 Wochen bei 4 o C lagern.<br />

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