SS 2005 BIOCHEMISCHE ARBEITSMETHODEN für Biologen ...

4. Zweidimensionale (2D)-Gelektrophorese
4.1 Allgemeines
Mit Hilfe der zweidimensionalen Elektrophorese nach O’Farrell kann eine Mischung von bis zu 5000
Proteinen hinreichend gut in einzelne Spezies aufgetrennt werden. Bei dieser hochauflösenden Technik
wird die Mischung erst einer isoelektrischen Fokussierung (IEF) in einer Gel-Kapillare unterworfen (Abb.
4.1a). Die isoelektrische Fokussierung wird in gleicher Weise durchgeführt wie die Elektrophorese, nur
mit dem Unterschied, dass vor der Probenauftragung dem Gel beigefügte Ampholyte elektrophoretisch
getrennt werden und dabei einen pH-Gradienten innerhalb des Gels aufbauen. Nach Beendigung der IEF
wird das IEF-Gel auf ein konventionelles SDS-Gel überführt und die Proteine werden nun durch SDS-
Gelelektrophorese nach ihrem Molekulargewicht getrennt (Abb. 4.1b).
Abbildung 4.1: Prinzip der zweidimensionalen Gelelektrophorese. a) Trennung der Proteine in der
IEF nach Ladung. Nach Aufbringen des IEF Gelstäbchens auf das SDS-Gel werden die Proteine
dann nach Molekulargewicht getrennt.
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