SS 2005 BIOCHEMISCHE ARBEITSMETHODEN für Biologen ...

Lösungen:
1. Erste Dimension Monomer Lösung
9.2 M Harnstoff 5.5 g
4% Acrylamid 1.33 mL von der Acrylamid Stock Lösung
2.0% Triton X-100 2.0 mL 10% Triton X-100 Stock
1.6% Bio-Lyte 5/7 Ampholyte 400 µL
0.4% Bio-Lyte 3/10 Ampholyte 100 µL
0.01% Ammonium Persulfat (APS) 10 µL 10% Ammonium Persulfat (frisch ansetzen)
0.1% TEMED 10 µL TEMED
1.97 mL H2O
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Ergibt 10 mL Lösung.
Harnstoff einwiegen, dann die anderen Lösungen bis auf APS und TEMED zufügen. Im Wasserbad
erwärmen, um den Harnstoff zu lösen . Zum Gießen der Kapillar-Gele APS und TEMED zugeben,
kurz umschütteln und dann die Kapillaren füllen
2. Acrylamid Stocklösung (cancerogen, deshalb Handschuhe!)
Acrylamid/bis 28.38 g
(30% T/5.4% C) 1.62 g
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100 mL
(wird gestellt)
3. 10% Triton X-100 Stock Lösung
10 g Triton X-100 mit 100 mL mit H2Odest. verdünnen
4. 40% Triton X-100 Stock Lösung
4 g Triton X-100 mit 10 mL mit H2Odest. verdünnen
5. Probenpuffer für die erste Dimension
9.5 M Harnstoff 5.7 g
2.0% Triton X-100 2.0 mL10% Triton X-100 stock
5% β-Mercaptoethanol 0.5 mL
1.6% Bio-Lyte 5/7 Ampholyte 400 µL
0.4% Bio-Lyte 3/10 Ampholyte 100 µL
auf 10 mL mit H2Odest. verdünnen. Im Wasserbad (