SS 2005 BIOCHEMISCHE ARBEITSMETHODEN für Biologen ...

Die Zunahme der Extinktion sollte möglichst nicht mehr als 0,05 Extinktionseinheiten pro Minute betragen
(sonst weniger Enzym einsetzen bzw. verdünnen).
Für die Auswertung der Schreiberdaten ist der Schreibervortrieb zu notieren. Da Schreibersignal und
am Photometer gezeigte Extinktion nicht aufeinander kalibriert sind, muss auch notiert werden, welche
Extinktion dem Schreiberausschlag zugeordnet ist. Für die Berechnung der Enzymaktivität sind
ausschließlich Daten aus dem linearen Bereich der Messung zu verwenden.
Berechnung der Aktivität
Extinktionsänderung
ΔE
Schreibervorschub
Zeit t
linearer Bereich
Sprung bei
Reaktionsstart
Nulllinie
Die Aktivitätsmessung erfolgt photometrisch, Grundlage der Messung ist das „Lambert-Beer’sche
Gesetz“. Nach diesem Gesetz ist die photometrische Extinktion E proportional zur Schichtdicke der
Messlösung d und der Konzentration der gelösten Substanz c. Der Proportionalitätsfaktor
(„dekadischer Extinktionskoeffizient“) ist u.a. abhängig von der Substanz und der verwendeten
Wellenlänge. Die Enzymaktivität EA wird gemessen in der umgesetzten Teilchenanzahl des
Substrates Δn pro Zeit t.
E = ε • d • c (Lambert-Beer) bzw. ΔE = ε • d • Δc
Δn
Δc =
V
Δn
EA =
t
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