SS 2005 BIOCHEMISCHE ARBEITSMETHODEN für Biologen ...
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Inhaltsverzeichnis<br />
1. Isolierung von Alkohol-Dehydrogenase aus Bäckerhefe 4<br />
1.1 Allgemeines 4<br />
1.2 Gewinnung eines ADH-Rohextrakts aus Bäckerhefe 6<br />
1.2.1 Aufschluß der Hefezellen 7<br />
1.2.2 Hitzedenaturierung von Fremdprotein 9<br />
1.2.3 Fraktionierte Ammoniumsulfatfällung 9<br />
1.2.4 Ermittlung des Fraktionierungsbereiches <strong>für</strong> die Fällung der ADH durch<br />
Ammoniumsulfat 10<br />
1.2.5 Dialyse<br />
1.3 Äktaprime: Ein Gerät <strong>für</strong> die FPLC 11<br />
1.4 Anionenaustauschchromatographie (DEAE Sepharose) 13<br />
1.4.1 Allgemeines 13<br />
1.4.2 Aufreinigung von ADH mittels Anionenaustausch-Chromatographie 14<br />
1.5 Affinitätschromatographie 16<br />
1.5.1 Allgemeines 16<br />
1.5.2 Aufreinigung von ADH mittels Affinitätschromatographie 17<br />
1.6 Aktivitätstest 18<br />
1.7 Proteinbestimmung 20<br />
2. ELISA 21<br />
2.1 Allgemeines 21<br />
2.2 Lösungen 22<br />
2.4 Pipettierschema 23<br />
2.5 Durchführung 23<br />
2.6 Auswertung 23<br />
3. Diskontinuierliche Gelelektrophorese und Western Blot 24<br />
3.1 Allgemeines 24<br />
3.2 Probenaufarbeitung 25<br />
3.2 Gelvorbereitung 26<br />
3.3 Elektroblot 28<br />
3.4 Antikörpernachweis 29<br />
4. Zweidimensionale (2D)-Gelektrophorese 31<br />
4.1 Allgemeines 31<br />
4.2 2D-Gelelektrophorese 32<br />
4.2.1 1. Dimension 32<br />
4.2.2 2. Dimension 34<br />
4.2.3 Silberfärbung 35<br />
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