Self-Assembly of Synthetic and Biological Polymeric Systems of ...

fibras amiloides, la agregación de la albúmina sérica se puede promover cambiando las
condiciones de disolución (tales como de pH, altas temperaturas y por medio de agentes químicos
desnaturalizantes), favoreciendo la desestabilización de la estructura nativa de la HSA.
Así, en este trabajo se analizó la predisposición a la fibrilación de la HSA bajo diferentes
condiciones de disolución (pH, temperatura, fuerza iónica, composición del disolvente), así como
las propiedades físicas y estructurales de las fibras amiloidales resultantes. Las cinéticas de
agregación, los cambios conformacionales durante la auto-asociación de los monómeros de
albúmina y las estructuras de las diferentes estructuras intermedias en la ruta de fibrilación se
determinaron por fluorescencia de Tioflavina T (ThT) y absorbencia del Congo red; dicroísmo
circular (CD); fluorescencia intrínseca de la HSA; espectroscopía de infra-rojo (FTIR); difracción de
rayos-X; TEM; SEM y AFM. El proceso de la fibrilación de la HSA se prolonga durante varios días de
incubación, y se lleva a cabo sin la presencia de una fase de demora; excepto cuando las
disoluciones de albúmina se incubaron a pH ácido, temperatura ambiente y en ausencia de
electrólito. La ausencia de la fase de demora se debe al hecho de que la agregación inicial está
dirigida por el mecanismo denominado “cuesta abajo”, que no requiere de una alta organización
estructural ni de la formación de núcleos proteicos inestables. El proceso de fibrilación de la HSA
está acompañada por un incremento progresivo de la estructura secundaria hoja-β y estructuras
ordenadas al azar; esta transición se lleva a cabo a expensas de la estructura α-hélice, como se
observó mediante espectroscopía de fluorescencia de ThT, de CD y de FTIR. De acuerdo a las
distintas condiciones de incubación, la estructura nativa de la proteína se altera de distinta
manera/grado, implicando una variación en el contenido de las diferentes estructuras secundarias;
estas variaciones implican la aparición de diversos agregados estructurales que se forman en el
proceso de agregación fibrilar. Estos agregados pueden tomar la forma de: clústeres oligoméricos
globulares, estructuras rígidas esféricas y agregados en forma de anillos. La formación fibrilar
puede tener lugar a través de la asociación de los intermedios oligoméricos mencionados,
conduciendo a la formación de protofibras y, posteriormente, fibras. Estas fibras resultantes son
alargadas, con ondulaciones. La longitud de las fibras obtenidas depende de las condiciones de
incubación. Probablemente las hebras-β que componen la estructura de hoja-β en las fibras de
HSA se encuentran en un arreglo antiparalelo. La aparición de fibras amiloides maduras con
estructuras morfológicas más complejas tiene lugar a largos periodos de incubación (fibras largas y
rígidas, estructuras planas y alargadas, etc.). La tendencia de los oligómeros proteicos a alinearse
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