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concentró en rotavapor hasta un volumen de 1.5 mL en metanol para de aquí aplicar a TLC. Para la separación preparativa de los componentes se utilizó la TLC antes mencionada. De las bandas identificadas en TLC de color rojo-naranja, la mayoritaria de color rojo y con un Rf = 0.6, fue seleccionada por presentar mayor concentración de pigmento a la vista, esta fue eluída y analizada por HPLC como se describe a continuación: La muestra se separó por HPLC utilizando una columna de fase reversa: VYDAC C-18 250 X 4.6 mm en un equipo (Agilent Technologies Modelo 1200), se inyectaron 10 µL y para su elución se utilizó el sistema de solventes: Solvente A : H2O pH 2.3 (ajustado con ácido acético); Solvente B : H2O/ acetonitrilo/H2O pH 2.3 (ajustado con ácido acético) en una proporción de 107/ 50 / 40 en base a volumen. El gradiente deelución se ajustó t0 = 20% B incrementándose gradualmente hasta t45 = 70% B. El flujo se mantuvo a 1 mlmin -1 , y se hizo un seguimiento a longitud de onda 510 nm. A los picos con tiempo de retención de 3.427 y 3.748 (Diagrama 2) respectivamente, se les registró la absorción en la región ultravioleta visible desde 200 a 700 nm (Diagramas 3 y 4). 34
Fotografía 1: Bandas de separación en TLC con Rf = 0.6 Diagrama 1: Espectro de masas para el compuesto mayoritario de la banda con Rf=0.6 observándose un componente con peso molecular 433,14 m/z y un ión padre de 272m/z 35
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