Biodisponibilidad de los flavonoides de la ... - Cerveza y Salud

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mos 3 veces con 1 mL de etanol:acetato de etilo (1:1 v/v). Centrifugamos otra vez a
12.600 rpm durante 3 minutos y recogemos el pellet. Finalmente añadimos 1 mL de
Guanidina 6 N a pH: 2,3, centrifugamos a 12.600 rpm y medimos el sobrenadante a
una λ= 366 nm frente a una solución de guanidina.
2.2.15. DETERMINACIÓN DE α-TOCOFEROL EN PLASMA HUMANO
Se utilizó la técnica de HPLC de Arnaud et al. (1991). Se toman 200 mL de plasma y
se mezclan con 100 µL de etanol, se añaden 500 mL de hexano, se centrifuga y se
recoge la fase orgánica, la cual se lleva a secado con N2 seco y finalmente se resuspende
con 200 µL de fase móvil (diclorometano/acetonitrilo /metanol, 20:70:10). Se
mide a una λ de 291 nm.
2.2.16. TRATAMIENTO DE LA SANGRE PARA LA DETERMINACIÓN DEL GSH Y
HEMOGLOBINA EN HUMANOS
Se toma una alícuota de sangre heparinizada y se centrifuga a 3.000 rpm durante 10
minutos. Separamos el plasma y lo congelamos a -80ºC. Las células se transfieren a
un tubo cónico de vidrio, se le añade aproximadamente la misma cantidad de agua
MiliQ (1.5 mL células + 1.5 mL agua). Posteriormente, dejamos a 4ºC durante 2 horas
para que se hemolice (determinación de Hemoglobina). A 1,88 mL del hemolizado
se añade 0,8 mL de mezcla cloroformo:etanol (3:5 v/v) frío y 0.3 mL agua MiliQ.
Se centrifuga a 4000 rpm 10 minutos y del sobrenadante determinamos los niveles
de GSH (Maral et al.,1977).
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2.2.17. DETERMINACIÓN DE LA HEMOGLOBINA (HB) EN SANGRE DE HUMANOS
A 20 µL de muestra se le añaden 5 mL de solución Drabkin (Drabkin´s reagent