PRODUKSI GELATIN DARI TULANG IKAN DAN ...

selama 20 menit, kemudia bagian tengah tabung ditutup dengan cara memanaskannya
di atas api. Ampul yang telah ditutup dimasukkan ke dalam oven pada suhu 110 o C
selama 24 jam.
Selanjutnya sampel yang telah dihidrolisis didinginkan pada suhu kamar,
kemudian isinya dipindahkan ke dalam labu evaporator 50 ml, ampul dibilas 2 – 3 kali
menggunakan 2 ml HCl 0,01N dan cairan bilasannya dimasukkan ke dalam labu
evaporator. Sampel kemudia dikeringkan menggunakan freeze dyer dalam keadaan
vakum. Selanjutnya sampel yang telah kering ditambah 5 ml HCl 0,01 N dan larutan
ini siap untuk dianalisis.
Larutan sampel yang telah dihidrolisis kemudian disaring menggunakan kertas
milipore, kemudia ditambahkan buffer kalium borat pH 10,4 dengan perbandingan 1 :
1. Ke dalam vial kosong yang masih bersih dimasukan 10 µl sampel dan ditambahkan
25µl pereaksi OPA (larutkan 50 mg OPA dalam 4 ml metanol dan tambahkan 0,025
ml merkaptoetanol, kocok hati-hati campuran tersebut, tambahkan larutan brij-30 30%
dan 1 ml buffer borat 1 M, pH 10,4), kemudian dibiarkan selama 1 menit agar
derivatisasi berlangsung sempurna. Selanjutnya sebanyak 5 µl larutan tersebut
diinjeksikan ke dalam kolom HPLC dan pemisahan asam amino terjadi sekitar 25
menit. Kondisi HPLC pada saat dilakukan analisis adalah sebagai berikut :
- Kolom : Ultra techspere
- Laju aliran fase mobil : 1 ml/menit
- Detector : Fluorosensi
- Fase Mobil : - Buffer A (Na- asetat 0,025 M; Na-EDTA 0,05%;