APPUNTI DI MICROBIOLOGIA - Istituto Comprensivo "G. Palatucci"

Giordano Perin; microbiologia 6: le analisi microbiologiche
determina quale delle tre specie sia coinvolta nella infezione.
si tratta di una procedura MOLTO COSTOSA e non si esegue quasi mai, nella realtà
laboratoristica, infatti, si cerca di utilizzare un metodo lievemente diverso:
si inseriscono degli anticorpi MA NON FLUORESCEINATI nei campioni
preparati in modo analogo al caso precedente.
si lavano i campioni come in precedenza.
si inseriscono degli anticorpi anti anticorpo FLUORESCEINATI nei tre campioni.
si lascia agire e si lavano i campioni; come in precedenza:
l'anticorpo che ha trovato il suo substrato permane in loco.
l'anticorpo che non trova il suo substrato viene lavato via.
È facile in questo modo identificare il campione che presenta anticorpi
attivi.
A livello di costo questa tecnica è molto vantaggiosa, in particolare:
• consente di conservare un unico anticorpo fluoresceinato in laboratorio.
• La fluorescina decade nel tempo, di conseguenza una fluoresceinazione di
anticorpi per malattie rare sarebbe futile.
NELLA ANALISI INDIRETTA:
è possibile identificare la presenza di anticorpi in un campione in questo modo:
si acquistano dei vetrini modificati di modo da poter ospitare dei pozzetti
disposi in due file da cinque e sul fondo di ciascuno di essi si pone il
patogeno specifico.
si aggiunge il siero del paziente diluito in modo sempre più consistente nei
diversi pozzetti.
a questo punto è possibile analizzare la presenza nel campione di IgG o IgM
per quel dato antigene:
in una serie di pozzetti inserisco anticorpi anti IgG.
Nella seconda serie di pozzetti inserisco anticorpi anti IgM.
se il paziente è negativo in entrambe le file, allora non è infetto né lo è stato;
in caso contrario:
se positivo per le IgG gli anticorpi sono formati e l'infezione è quasi
certamente debellata.
se positivo per le IgM l'infezione è in corso ed è necessario agire.
questo tipo di prova si utilizza soprattutto per PATOLOGIE PERICOLOSE DURANTE LA
GRAVIDANZA: è possibile infatti determinare con certezza se una infezione
pericolosa sia in atto o sia trascorsa o non sia mai avvenuta.
ALTERNATIVAMENTE ALLA FLORESCINA, piuttosto costosa, si possono UTILIZZARE
ALTRI METODI PER MARCARE GLI ANTICORPI, per esempio:
ELISA enzime linked immunosolvent assey.
EIA enzime immuno assay.
RIA radioimmunoassey.
MOLECOLE ENZIMATICHE: i metodi precedentemente descritti prevedono la
marcatura diretta dell'anticorpo, è possibile anche marcare l'anticorpo con
una molecola enzimatica la cui azione produca un risultato visibile: se
l'anticorpo trova il suo antigene e permane in loco anche a seguito di
lavaggi, è possibile individuarlo inserendo il substrato della molecola
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