sodininkystė ir daržininkystė 31(3–4)

taikant FRAP metodą, neturi antioksidantinių savybių (Prior, Cao, 1999). Taip pat antioksidantai,kurių veikimas paremtas vandenilio atomo perdavimo reakcijomis (tioliai,karotenoidai), FRAP metodu negali būti nustatinėjami (Ou ir kt., 2002; Pulido ir kt.,2000). Šiam metodui būtina rūgštinė (pH 3,6) terpė gali turėti įtakos baltymų (pavyzdžiui,kazeino piene) nusėdimui (Chen ir kt., 2003). Pulido ir kt. (2000) pastebėjo,kad taikant FRAP metodą fenolinių junginių antioksidantinis aktyvumas priklauso nuoreakcijos laiko. Kavos rūgštis, ferulo rūgštis, kvercetinas ir elago rūgštis po 4 min.nepasiekė reakcijos pusiausvyros būsenos. Net ir po keletos valandų absorbcija lėtaididėja (Pulido ir kt., 2000). Tai apsunkina galimybę taikyti fiksuotą reakcijos laiką.Nepaisant rūgštinės (pH 3,6) terpės (fiziologinėmis sąlygomis pH 7,4) ir kitųaprašytų trūkumų, FRAP metodas plačiai taikomas maisto ir augalų ekstraktuose,plazmoje ir kituose biologiniuose skysčiuose esančių junginių redukcinei galiai įvertinti(Haldar ir kt., 2007; Pulido ir kt., 2003; Surveswaran ir kt., 2007). FRAP metodas yrapaprastas, palyginti nebrangus, nereikia specialios aparatūros.E S C p o k o l o n ė l i n i s m e t o d a s. ESC pokolonėlinei reakcijai atlikti FRAPreagentą pirmą kartą panaudojo Raudonis ir kiti (2012). ESC-FRAP pokolonėliniumetodu įvertinamos atskirtų individualių junginių redukcinės savybės pagal geležiesjono redukcijos galią. Pratekančio eliuento ir FRAP reagento mišinio absorbcija, esant593 nm bangos ilgiui, padidėja įvykus reakcijai su redukcinių savybių turinčiomisanalitėmis (Gungor ir kt., 2011; Halvorsen, Blomhoff, 2011). Pokolonėlinėje chromatogramojeabsorbcijos pokyčiai fiksuojami kaip teigiamos smailės. Pagal gautos smailėsplotą kiekybiškai (trolokso ekvivalentais) įvertinamas junginio redukcinis aktyvumas.FRAP reagentas ruoštas pagal Benzie ir Strain (1996, 1999) aprašytas spektrofotometriniotyrimo metodikas. Darbinis FRAP tirpalas į pokolonėlinę sistemą tiektasnuolatinio veikimo ESC siurbliu. Pokolonėliniam reaktoriui panaudota reakcijos kilpa,pagaminta iš 15 m ilgio 0,3 mm vidinio skersmens TFE vamzdelio. Autoriai optimizavodarbinio FRAP tirpalo koncentraciją ir reakcijos laiką. Raudonis ir kt. (2012) nustatė,kad optimalios sąlygos pokolonėlinei reakcijai vykti yra tada, kai FRAP reagentokomponentų koncentracija reaktoriuje siekia 123 μM TPTZ ir 246 μM FeCl 3•6H 2O,o reakcijos trukmė – apie 40 sekundžių. Taip pat autoriai pažymi, kad į pokolonėlinęsistemą tiekiamas darbinis FRAP reagentas yra nespalvotas. Spalva atsiranda tik poreakcijos su redukcinių savybių turinčiu junginiu. Dėl šios priežasties FRAP reagentokoncentracijos ir tėkmės greičio įtaka bazinės linijos triukšmui pokolonėlinėje chromatogramojeyra labai neryški. Tai suteikia metodui pranašumo prieš ESC-DPPH irESC-ABTS pokolonėlinius metodus.ESC-FRAP pokolonėlinis metodas buvo sėkmingai pritaikytas žemuogių lapų irvaisių augalinės žaliavos etanolinių ekstraktų redukciniam aktyvumui tirti (Raudonisir kt., 2012). ESC-FRAP yra patikimas pokolonėlinis metodas įvairių junginių antioksidantiniamaktyvumui įvertinti, nes tiriamo junginio antioksidantinė galia yra tiesiogiaisiejama su jo redukcine galia (Firuzi ir kt., 2005). Šis metodas tinkamas augaliniuoseekstraktuose esančių junginių redukcinėms savybėms nustatyti ir kiekybiniam redukcinioaktyvumo įvertinimui atlikti.CUPRAC metodas pagrįstas dvivalenčio vario ir neokuproino (2,9-dimetil-1,10-fenan-trolino) (Cu(II)-Nc) komplekso redukcija antioksidantu į chromogeninįCu(I)-Nc kompleksą.25