sodininkystė ir daržininkystė 31(3–4)

RNR degradacijos.D a u g i n a m o s i o s m e d ž i a g o s r u o š i m a s i r a t r a n k a. Ruošiantdauginamąją medžiagą bei imant ėminius, buvo laikomasi Lietuvos Respublikos žemėsūkio ministro 2005 m. spalio 12 d. įsakymu Nr. 3D-480 patvirtintų Sodo augalųdauginamosios medžiagos dauginimo taisyklių.R N R i š s k y r i m a s i r k D N R s i n t e z ė . RNR iš augalų lapų išskirta naudojantNucleoSpin ® RNA Plant (Macherey – Nagel) rinkinį pagal gamintojo pridėtąprotokolą. Išskirta RNR naudota komplementariai DNR (kDNR) sintetinti. kDNRsintezė atlikta naudojant RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit („Fermentas“)rinkinį pagal gamintojo protokolą.P G R m e t o d a s. Virusų paieškai naudoti viruso baltymui specifiniai oligonukleotidiniaipradmenys (1 lentelė).1 lentelė. Specifinės obelų virusams oligonukleotidų sekos ir pradmenų hibridizacijostemperatūraTable 1. Specific oligonucleotide probes for apple viruses and hybridization temperatureof primersVirusasVirusApMV Obelųmozaikos virusasApple mosaic virusACLSV Obelųlatentinis chlorotinėsdėmėtligėsvirusasApple chloroticleaf spot virusASGV Obelųstiebų griovėtumovirusasApple stem groovingvirusASPV Obelųstiebų duobėtumovirusasApple stem pittingvirusSpecifinės oligonukleotidų sekosSpecific oligonucleotide probesF -5’GCGGTCAACATGGTCTGCAAGTAC3’R -5’CTAACAAATCTTCATCGATAAGGCGG3’F-5’TTCATGGAAAGACAGGGGCAA3’R-5’AAGTCTACAGGCTATTTATTATAAGTCTAA3’F-5’GCCACTTCTAGGCAGAACTCTTTGAA3’R-5’AACCCCTTTTTGTCCTTCAGTACGAA3’F-5’ATGTCTGGAACCTCATGCTGCAA3’R-5’TTGGGATCAACTTTACTAAAAAGCATAA3’T pradmenųhibridizacijaT for primershybridization,°C59626458,4kDNR amplifikavimo reakcija vyko 20 μl mišinyje, sudarytame iš 2,5 μl10 × Taq DNR polimerazės buferio, 2 μl 25 mM MgCl 2, 0,4 μl 10 mM dNTP mišinio,2 × 20 pmol specifinių viruso genomui pradmenų, 1U Taq DNR polimerazės ir5