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artigo 2 AUTORES: CARLA MARIA MARIANO FERNANDEZ, JOÃO RICARDO RUTKAUSKIS, GIOVANE DOUGLAS ZANIN E MAURICIO FERREIRA DA ROSA. Limites de quantificação (LQ) e detecção (LD) Os limites de quantificação (LQ) e de detecção (LD) foram calculados a partir das curvas de calibração utilizando as equações10σ/S e 3.3σ/S, respectivamente, onde σ é o desvio padrão da resposta e S é o coeficiente angular da curva (ANVISA, 2003; ICH, 2005a; ICH, 2005b; BORBA et al., 2013). Precisão A precisão intradia (repetibilidade) foi avaliada através de medições, em triplicata, de três soluções de amostra na concentração de 10 μg mL-1, em diferentes períodos do mesmo dia (manhã, tarde e noite) sobre as mesmas condições experimentais. A precisão interdias (precisão intermediária) foi avaliada através dos resultados obtidos pelas análises das amostras na mesma concentração de 10 μg mL-1, em dias seguidos e distintos. O parâmetro de precisão foi avaliado para a Tadalafila matéria-prima (ANVISA, 2003; ICH, 2005a; ICH, 2005b; BORBA et al., 2013). Exatidão Para determinação da exatidão, procedeu-se à adição de soluções de concentrações conhecidas do padrão Tadalafila (5, 10 e 15 μg mL-1) à solução amostra (10 μg mL-1), de modo a compreender as concentrações finais obtidas dentro da faixa de linearidade do método (15, 20 e 25 μg mL-1). Os valores de recuperação, expressos em porcentagem, foram determinados a partir das respostas analíticas obtidas das soluções finais em função da quantidade teórica de padrão adicionado (ANVISA, 2003; ICH, 2005a; ICH, 2005b; BORBA et al., 2013). Robustez A robustez do método proposto foi determinada em triplicata, a partir de soluções de trabalho na concentração de 10 μg mL-1, variando-se os comprimentos de onda (279, 284 e 289 nm), a marca de solvente (Anidrol, Nuclear e Laborclin) e tempo de sonicação (0, 5 e 10 minutos) (ANVISA, 2003; ICH, 2005a; ICH, 2005b; BORBA et al., 2013; OLIVEIRA et al., 2006). Análises estatísticas A análise estatística dos dados foi realizada através de análise de variância ANOVA unifatorial, onde os resultados são considerados significativos quando a probabilidade é inferior a 5% (p < 0,05, intervalo de confiança de 95%), teste t de Student com nível de significância α= 0,05 (intervalo de confiança de 95%). A avaliação estatística dos resultados foi realizada através do software Microsoft Office Excel®, versão 2010. % de fármaco remanescente 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 RESULTADOS Estabilidade da solução A Figura 2 mostra os resultados obtidos para a estabilidade da solução. Pode-se observar que a solução não foi estável nos tempos avaliados, pois os resultados ficaram abaixo da porcentagem mínima estipulada de 95%. Figura 1 – Fórmula estrutural da tadalafila 0 24 48 Tempo (horas) Figura 2 - Estabilidade da Figura solução 2 - de Tadalafila 10 μg mL -1 em temperatura ambiente e a Estabilidade da solução de Tadalafila 10 μg mL-1em temperatura ambiente e a 22ºC Imagem Ilustrativa 028 1 Revista NewsLab | Dez/Jan 18
Marco do Solvente Concentração da Concentração aferida a F calculado Tabela Tabela 1. 1. Resultados da análise de regressão para quantificação de tadalafila pelo método proposto Resultados da análise de regressão para quantificação de tadalafila pelo método proposto Parâmetros estatísticos Método UV (µg/mL) Equação de regressão y = 0,037x - 0,006 Coeficiente Tabela 1. Resultados de correlação da análise (r) de regressão para quantificação 0,998 de tadalafila pelo método proposto Concentração Parâmetros estatísticos (µg/mL) Método 1 – 25 UV (µg/mL) Equação de regressão y = 0,037x - 0,006 Coeficiente de correlação (r) 0,998 Validação do método dade do analito presente na amostra que F tabelado 5,14 para a precisão intra-dia analítico Concentração por (µg/mL) pode ser detectado, 1 – porém 25 não necessariamente quantificado, sob condições de 0,25 e F tabelado 5,14 para p
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