Temel ve İleri Moleküler Biyoloji Yöntemleri Genomik ve Proteomik Analizler
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
22.A Serbest Fetal DNA’da Trizomi21 Tanısı için aCGH<br />
Tuba GÜNEL<br />
Günümüzde genetik <strong>ve</strong> genomik bilgilerin teknoloji ile birleşmesi gebelik sürecine önemli katkı sağlamıştır. Anne<br />
kanından fetüse ait DNA’yı girişimsel olmayan (“non-invasi<strong>ve</strong>”) yöntemlerle izole etme çalışmalarının başarılı olması,<br />
fetüse ait hücre dışı DNA (“cell-free fetal DNA”, cff-DNA) biyolojisi ile ilgili temel bilgilere ulaşılmasını sağlamıştır. Son<br />
yıllarda bu konuda tüm dünyada <strong>ve</strong> ülkemizde çok hızlı bir ilerleme kaydedilmiştir.<br />
Trizomi21’li (Down sendromlu) fetüslerin doğum öncesi saptanması dünyadaki tüm tarama programlarının<br />
önemli bir hedefidir. cff-DNA örneklerinde karşılaştırmalı genomik melezleme mikrodizilimi (aCGH) (bkz. 22.1.1)<br />
ile Down sendromu taraması, günümüzde klinikte kullanılan serum tarama algoritmaları ile karşılaştırıldığında<br />
daha özgül <strong>ve</strong> duyarlıdır. Girişimsel yöntemlerde söz konusu olan düşük riskini içermez. Gebeliğin 10. haftasında<br />
uygulanabilmesinden dolayı erken <strong>ve</strong> hızlı sonuç <strong>ve</strong>rme avantajıyla da komplikasyonlu gebeliklerde önlem alma<br />
şansını artırır.<br />
Materyal<br />
9-11. gebelik haftaları arasındaki gebeden alınan 5 mL toplardamara ait (<strong>ve</strong>nöz) kan örneğinden elde edilen kan<br />
plazması<br />
Gerekli Malzemeler<br />
Rastgele primer (“random primer) (Agilent Technologies)<br />
“SureTag Complete” DNA İşaretleme Kiti (Agilent Technologies)<br />
1xTE Tamponu, pH 8.0 (Promega)<br />
Saflaştırma kiti (Agilent Technologies)<br />
Melezleme odacıkları-lastikli slaytlar (Agilent Technologies)<br />
SurePrint G3 Custom CGH Array 4x180K çipi (Agilent Technologies)<br />
“Oligo aCGH/ChIP-on-chip” yıkama tamponu 1 (Agilent Technologies)<br />
“Oligo aCGH/ChIP-on-chip” yıkama tamponu 2 (Agilent Technologies)<br />
“Oligo aCGH/ChIP-on-chip” melezleme kiti (Agilent Technologies)<br />
Asetonitril (%100)<br />
“Agilent CytoGenomics” yazılım lisansı<br />
Yöntem<br />
_ Çalışma sırasında herhangi bir bulaşmayı engellemek için çok temiz bir alanda çalışılmalı, pudrasız eldi<strong>ve</strong>n<br />
kullanılmalıdır. Stok çözeltilere fazla dondurma/çözündürme yapılmamalıdır.<br />
1. Isıtıcı bloklar ya da su banyoları 95, 37 <strong>ve</strong> 65 o C’a ayarlanır.<br />
_ İsteğe bağlı olarak ısıtma işlemleri için PCR aletinden yararlanılabilir.<br />
2. Örnekler 6000xg hızda 1 dakika santrifüjlenerek tüpün duvarlarında ya da kapağında kalmış çözeltiler dibe<br />
indirilir.<br />
3. Her bir tüpe 13 µL örnek <strong>ve</strong> 2.5 µL rastgele primer (”random primer”) konulur. Pipet yarımıyla karıştırılır <strong>ve</strong><br />
santrifüjde en yüksek hızda birkaç saniye çevrilir.<br />
455
Change language