TOPLUM VE HASTANE KAYNAKLI İNFEKSİYONLARDAN İZOLE ...

3.ARAÇLAR VE YÖNTEM
Çalışmamız 1 Ocak 2008 1 Ocak 2009 tarihleri arasında yürütülmüş ve Haydarpaşa
Numune Eğitim ve Araştırma Hastanesi Mikrobiyoloji Laboratuvarı’na başvuran
hastalardan izole edilen E coli’lerde GSBL oranı saptanmıştır. GSBL pozitif saptanan 100
E. coli’de farklı antibiyotiklere ve tigesikline duyarlılık oranları disk difüzyon yöntemi ile
araştırılmış, ayrıca tigesiklin duyarlılığı E-test yöntemiyle MİK düzeyinde belirlenmiştir.
Çalışmada kullanılan örnekler, polikliniklere başvuran veya çeşitli kliniklerde yatırılarak
tedavi edilen hastalardan elde edilmiştir. Aynı hastaya ait, tekrarlayan kültürde izole edilen
örnekler çalışma dışı bırakılmıştır.
Laboratuvara gönderilen klinik örnekler, uygun besiyerlerine ekimleri yapılarak,
35 0 C de 24 saat inkübe edilmiştir. Bu amaçla, önce Mc Conkey ve kanlı agara ekim
yapılmış ve gram negatif üreme olanlar ileri identifikasyon işlemine alınmıştır. İleri
identifikasyonda öncelikle konvansiyonel yöntemler kullanılmıştır. İdentifikasyon
işlemleri için TSİ besiyeri, citrat besiyeri, üre besiyeri, hareket besiyeri ayrıca, Kovaks ve
Clark ayıracı kullanılmıştır. Karbonhidratları kullanım özelliği, üreaz aktivitesi, sitrat
kullanımı, hareket özelliği ve indol oluşturma özelliği araştırılmıştır. Kan kültürleri için
BACTEC yöntemi kullanılmıştır. Kültür şişelerinde üreme olanlardan katı besiyerlerine
pasaj yapılmıştır. Gram negatif olanlardan aynı identifikasyon işlemlerine devam
edilmiştir. İzole edilen suşlardan identifikasyonu yapılamayan E coli tespiti, BBL Crystal
Enteric/Nonfermenter (BD BBL, USA) identifikasyon kiti ile yapılmıştır. Bakterilerin
GSBL tespiti, rutin olarak kullanılan çift disk sinerji testi ile yapılmıştır.
Disk difüzyon yöntemi için hazır toz besiyerinden Mueller-Hinton agar (Oxoid)
plakları hazırlanmış ve çalışmaya alınan klinik örneklerin çeşitli antibiyotiklere
duyarlılıklarını araştırmak için kullanılmıştır. Mueller-Hinton agar 4 mm kalınlığında petri
kutularına dökülerek hazırlanmış ve 24 saat buzdolabında bekletildikten sonra taze olarak
kullanılmıştır. 13 mm’lik cam petri kutusuna toplam 10 adet antibiyotik diski konulmuştur.
Tigesiklin, İmipenem, Meropenem, Tetrasiklin, Sefepim, Trimetoprim-sulfametoksazol,
Ciprofloksasin, Levofloksasin, Gentamisin, Amikasin diskleri konulmuştur. CLS I
klavuzu esas alınarak, suşlar duyarlı, az duyarlı ve dirençli olarak belirlenmiştir. Kontrol
suşu olarak, E.coli ATCC 25922 kullanılmıştır.
35