Anhang i. Simulationsmodell - FG Mikroelektronik, TU Berlin
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v. Präparation von Herzmuskelzellen<br />
Ansetzen der<br />
Lösung<br />
<strong>Anhang</strong> 142<br />
Präparation von Herzmuskelzellen<br />
Zur Präparation von Herzmuskelzellen aus erwachsenen Ratten (adult) werden<br />
folgende Lösungen 1 benötigt: Ca ++ -freie-Lösung (Tab. 12), Ca ++ -10mM-Lösung<br />
(Tab. 13), Extrazelluläre Lösung (Tab. 14). Zum Aufbewahren von Herzmuskelzellen<br />
wird die Glutamat KB Lösung (Tab. 16) verwendet, zum Patchen der Zellen muß<br />
zusätzlich die intrazelluläre Lösung (Tab. 15) angesetzt werden.<br />
Tab. 12:Ca ++ -freie-Lösung (pH 7,1 mit NaOH). Die Glucose wird erst kurz vor der<br />
Präparation hinzugegeben (MGW: Masse pro Mol).<br />
MGW Konzentration<br />
[mM]<br />
Damit die Ca ++ -freie-Lösung (Tab. 12) längere Zeit im Kühlschrank aufbewahrt<br />
werden kann, wird die Glucose zunächst weggelassen. Erst kurz vor Verwendung<br />
wird der entsprechende Anteil an Glucose gelöst. (In 150ml Ca ++ -freie-Lösung müssen<br />
0,300g Glucose gelöst werden.)<br />
Zur Herstellung der Ca ++ -freien-Lösung werden die Substanzen abgewogen und<br />
in destilliertem Wasser gelöst. Es wird eine um ca. 10% geringere Menge destilliertes<br />
Wasser als die angestrebte Lösungsmenge verwendet. Zur Einstellung des pH-<br />
Wertes wird unter ständigem Rühren tropfenweise gelöstes Natriumhydroxid (1M<br />
NaOH) hinzugegeben, bis der gewünschte pH-Wert erreicht ist. Die Lösung wird<br />
anschließend mit destilliertem Wasser bis zur angestrebten Menge aufgefüllt. Diese<br />
Vorgehensweise ist möglich, da die Lösung durch Hepes gepuffert wird. Die weiteren<br />
Lösungen werden analog angesetzt.<br />
Tab. 13:Ca ++ 10mM Lösung (CaCl 2 Lösung)<br />
Lösung<br />
1000 ml<br />
Lösung<br />
2000 ml<br />
NaCl 58,4 g 140,0 8,182 g 16,364 g<br />
KCl 74,6 g 5,8 0,432 g 0,864 g<br />
KH 2PO 4 136,0 g 0,5 0,068 g 0,136 g<br />
Na 2HPO 4<br />
(Na 2 HPO 4 2H 2 O)<br />
142,5 g<br />
177,9 g<br />
0,4<br />
0,4<br />
0,057 g<br />
0,071 g<br />
0,114 g<br />
0,142 g<br />
MgSo 4 120,0 g 0,9 0,108 g 0,216 g<br />
Glucose 180,2 g 11,1 2,000 g 4,000 g<br />
Hepes 238,3 g 10,0 2,383 g 4,766 g<br />
MGW Konzentration<br />
[mM]<br />
Lösung<br />
100 ml<br />
Lösung<br />
50 ml<br />
CaCl 2 2H 2 O 147,0 g 10 0,147 g 0,073 g<br />
1 Eine 1-molare Lösung (1 M Lösung) enthält immer 1 mol der betreffenden Substanz in 1 Liter Lösung.
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