Anhang i. Simulationsmodell - FG Mikroelektronik, TU Berlin

v.ii.Durchführung
Anhang 145
Präparation von Herzmuskelzellen
Nach der Betäubung der Ratte muß möglichst schnell das Herz mit einem langen
Aortaansatz herauspräpariert werden. Es ist besonders darauf zu achten, daß das
Herz nicht beschädigt wird. Das Herz wird in Ca ++ -freier-Lösung in die Petrischale
gelegt. Vorsichtig werden die Lungenreste und anderes Gewebe entfernt und die
Aorta freigelegt. Die Verzweigungen an der Aorta werden ggf. abgeschnitten, um
die Kanüle einzuführen. Dabei darf die Kanüle nicht zu weit in das Herz eingeführt
werden. Die Aorta wird zunächst mit der Hirschmannklemme an der Kanüle fixiert
und anschließend mit einem dünnen Faden festgebunden. Damit die Kanüle nicht
aus der Aorta herausrutschen kann, ist auf der Spitze der Kanüle ein Stück Gummischlauch
aufgeschoben und mit Sekundenkleber fixiert. Durch leichten Druck auf
die Spritze werden die Herzkranzgefäße und die Herzkammern freigespült. Erst
nach erfolgreichem Freispülen wird das Herz mit dem Drei-Wege-Hahn an der
Apparatur befestigt. Bevor der Drei-Wege-Hahn 1 geöffnet wird, muß mit einer
Spritze die Luft zwischen Drei-Wege-Hahn 1 und 2 herausgedrückt werden. Das
Herz wird 5 Minuten lang mit Ca ++ -freier-Lösung ausgewaschen. Dabei sollte das
Herz massiert werden, um die Blutreste möglichst vollständig zu entfernen. Die
Spülung erfolgt über einem Becherglas.
Nach 5 Minuten wird auf Enzymspülung umgeschaltet. Das Einhängeglas wird so
unter das Herz geschwenkt, daß das Herz in der Enzym-Lösung hängt. Mit einer
Glaspipette wird laufend Enzym-Lösung vom Einhängegefäß in das obere Gefäß
zurückgefüllt. Nach Ablauf der ersten 4 Minuten werden 15μl Ca ++ -10mM dazugegeben,
nach allen weiteren 4 Minuten werden jeweils 30μl Ca ++ -10mM hinzugegeben.
Insgesamt wird das Herz 24 Minuten mit Enzym-Lösung gespült. Vor dem
Freispülen des Herzens vom Enzym wird die restliche Ca ++ -freie-Lösung aus der
Apparatur von unten herausgesaugt. Mit einer Spritze werden anschließend von
unten 5ml Glutamat KB Lösung eingefüllt. Zum vollständigen Freispülen muß ggf.
Druck auf Hahn 5 angelegt werden, damit in ca. 5 min die gesamte Lösung durchgelaufen
ist.
Das Herz wird im oberen Drittel von der Kanüle abgeschnitten und über kreuz
zweimal von der Schnittkante her eingeschnitten. Zwei Bechergläser werden mit
etwas Glutamat KB Lösung gefüllt und das Herz wird im ersten Becherglas ca. 30
Sekunden, im zweiten Becherglas ca. 60 Sekunden geschwenkt. Jeweils ca. 2ml
der Zellemulsion werden auf eine 10ml Ampulle mit Glutamat KB Lösung verdünnt.
Abschließend muß die Apparatur mit destilliertem Wasser gründlich gespült werden.