Anhang i. Simulationsmodell - FG Mikroelektronik, TU Berlin

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einstellbare Pipette 100μl Kanüle mit Drei-Wege-Hahn Faden Hirschmannklemme Eis Präparationsbesteck. <strong>Anhang</strong> 144 Präparation von Herzmuskelzellen Thermostat auf 37°C vorheizen und eingefrohrene Glutamat KB Lösung im Wasserbad auftauen. Zur Ca ++ -freien-Lösung Glucose hinzugeben. In 150ml Ca ++ freier Lösung müssen 0,300g Glucose gelöst werden. Die Ca ++ -freie-Lösung sollte zum Kühlen auf Eis aufbewahrt werden. 5mg Enzym (Kollagenase A, Bochinger Mannheim GmbH) abwiegen, in 15ml Ca ++ freier Lösung (mit Glucose) auflösen und 15μl Ca ++ 10mM hinzugeben. Die Apparatur sollte vor jeder Präparation sehr gut mit destilliertem Wasser gespült werden. In Intervallen von 3-4 Präparationen ist es sinnvoll, die Apparatur mit Wasserstoffperoxid (6%) und Ethanol (100%) zu reinigen. Zum Füllen der Apparatur eine 10ml Spritze mit Ca ++ -freier-Lösung füllen und an den Drei-Wege-Hahn 2 (Abb. 136) ansetzen. Zunächst die Leitung zum Enzymgefäß, dann die Leitung zum Gefäß für die Ca ++ -freie-Lösung füllen. Es sollte darauf geachtet werden, daß die Leitungen blasenfrei sind. Gefäß für Ca ++ -freie-Lösung füllen, Enzymgefäß füllen und restliche Enzym-Lösung in das Einhängeglas geben. 5ml Spritze mit Drei- Wege-Hahn und Kanüle mit Ca ++ -freier-Lösung blasenfrei füllen. Fäden, Hirschmannklemme und Petrischale bereitlegen. In die Petrischale wird kurz vor Beginn der Präparation etwas Ca ++ -freie-Lösung gegossen. Präparationsplatz mit Papiertüchern auslegen und 30ml Becherglas mit Ca ++ - freier-Lösung für den Transport des Herzens füllen. Einhängeglas Enzym Ca ++ freie Lösung 4 5 Doppelwandgefäß Thermostat Kanüle Thermostat Abb. 136:Apparatur zur Präparation von Herzmuskelzellen 3 2 1
v.ii.Durchführung <strong>Anhang</strong> 145 Präparation von Herzmuskelzellen Nach der Betäubung der Ratte muß möglichst schnell das Herz mit einem langen Aortaansatz herauspräpariert werden. Es ist besonders darauf zu achten, daß das Herz nicht beschädigt wird. Das Herz wird in Ca ++ -freier-Lösung in die Petrischale gelegt. Vorsichtig werden die Lungenreste und anderes Gewebe entfernt und die Aorta freigelegt. Die Verzweigungen an der Aorta werden ggf. abgeschnitten, um die Kanüle einzuführen. Dabei darf die Kanüle nicht zu weit in das Herz eingeführt werden. Die Aorta wird zunächst mit der Hirschmannklemme an der Kanüle fixiert und anschließend mit einem dünnen Faden festgebunden. Damit die Kanüle nicht aus der Aorta herausrutschen kann, ist auf der Spitze der Kanüle ein Stück Gummischlauch aufgeschoben und mit Sekundenkleber fixiert. Durch leichten Druck auf die Spritze werden die Herzkranzgefäße und die Herzkammern freigespült. Erst nach erfolgreichem Freispülen wird das Herz mit dem Drei-Wege-Hahn an der Apparatur befestigt. Bevor der Drei-Wege-Hahn 1 geöffnet wird, muß mit einer Spritze die Luft zwischen Drei-Wege-Hahn 1 und 2 herausgedrückt werden. Das Herz wird 5 Minuten lang mit Ca ++ -freier-Lösung ausgewaschen. Dabei sollte das Herz massiert werden, um die Blutreste möglichst vollständig zu entfernen. Die Spülung erfolgt über einem Becherglas. Nach 5 Minuten wird auf Enzymspülung umgeschaltet. Das Einhängeglas wird so unter das Herz geschwenkt, daß das Herz in der Enzym-Lösung hängt. Mit einer Glaspipette wird laufend Enzym-Lösung vom Einhängegefäß in das obere Gefäß zurückgefüllt. Nach Ablauf der ersten 4 Minuten werden 15μl Ca ++ -10mM dazugegeben, nach allen weiteren 4 Minuten werden jeweils 30μl Ca ++ -10mM hinzugegeben. Insgesamt wird das Herz 24 Minuten mit Enzym-Lösung gespült. Vor dem Freispülen des Herzens vom Enzym wird die restliche Ca ++ -freie-Lösung aus der Apparatur von unten herausgesaugt. Mit einer Spritze werden anschließend von unten 5ml Glutamat KB Lösung eingefüllt. Zum vollständigen Freispülen muß ggf. Druck auf Hahn 5 angelegt werden, damit in ca. 5 min die gesamte Lösung durchgelaufen ist. Das Herz wird im oberen Drittel von der Kanüle abgeschnitten und über kreuz zweimal von der Schnittkante her eingeschnitten. Zwei Bechergläser werden mit etwas Glutamat KB Lösung gefüllt und das Herz wird im ersten Becherglas ca. 30 Sekunden, im zweiten Becherglas ca. 60 Sekunden geschwenkt. Jeweils ca. 2ml der Zellemulsion werden auf eine 10ml Ampulle mit Glutamat KB Lösung verdünnt. Abschließend muß die Apparatur mit destilliertem Wasser gründlich gespült werden.
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Seite 9 und 10: iii.Schaltungsaufbau iii.i.Multiple
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Seite 13 und 14: -I ds [A] 800µ 700µ 600µ 500µ 4
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Seite 25 und 26: -I DS [A] 100µ 90µ 80µ 70µ 60µ
Seite 27 und 28: -I DS [A] 30µ 25µ 20µ 15µ 10µ
Seite 29 und 30: -I DS [A] -I DS [A] 500µ 400µ 300
Seite 35 und 36: -I DS [A] -I DS [A] 30µ 25µ 20µ
Seite 37: Tab. 14:Extrazelluläre Lösung (pH
Seite 41 und 42: Anhang 147 Ergebnisse aus Messungen
Seite 43 und 44: Strommodulation Transistor [A] intr
Seite 45 und 46: Strommodulation Transistor [A] intr
Seite 47 und 48: Strommodulation Transistor [A] Stim
Seite 57 und 58: Literatur 163 [23] J. Pine, Recordi

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