Untersuchung des Einflusses von Maservirus auf ... - OPUS Würzburg

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die CD3/CD28 Ligation induzierten Aktivierungscluster zu erhalten, wurden konfokale z-
Stapel der xy-Ebenen analysiert und eine Dekonvolution der Aufnahmen durchgeführt. Die
Aufnahmen in Abb. 5.4.A zeigen die Ebene, in der die Zellen in engem Kontakt mit den
Platten-gebundenen sind, d.h. eine Objektträger-nahe Ansicht. In der Kontrollzelle gut zu
erkennen sind die konzentrierten Cdc42 Aktivierungscluster, die sich auch in die
Membranausdehnungen hineinziehen (Pfeil in 5.4.A). Dagegen zeigen die WTF-behandelten
Zellen morphologische Veränderungen, deutlich verkürzte Lamellipodien und nur geringfügig
ausgebildete Cluster. Die selben Veränderungen finden sich auch in für Rac1-gefärbten Zellen
(Abb. 5.4.B). Diese konfokalen Aufnahmen zeigen die mittlere Zellebene. Gut zu erkennen
ist die drastisch verringerte ringförmige Membranlokalisation von Rac1. Des weiteren ist
Rac1 nur sehr schwach in Aktivierungsclustern konzentriert. Die quantitative Analyse der
WTF-behandelten T-Zellen ergab, bezogen auf die Gesamtzahl der untersuchten Zellen, für
Cdc42 ~30 % und für Rac1 ~20 % verringerte Membranlokalisation im Verhältnis zu
Kontrollzellen. Dagegen konnte in der Verteilung von RhoA kein Unterschied zwischen mock
und WTF-behandelten Zellen gefunden werden (Abb. 5.4.C). Wie in Abb. 5.8. gezeigt, sind
WTF-behandelte T-Zellen ~50 % weniger adhärent und gehen damit bei der Immunfluoreszenzanalyse
verloren. Vermutlich ist die Anzahl der T-Zellen, die nach WTF-Bindung
verändert sind, deutlich höher.