Untersuchung des Einflusses von Maservirus auf ... - OPUS Würzburg

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ähnliche Strukturen, die in den WTF-behandelten T-Zellen (B) fehlen. (C) 3-dimensionale Darstellung
der Zelle in A. (D) Die Zellen wurden behandelt wie in A und B und mit einem Ezrin Antikörper
gefärbt. (E) Quantitative Auswertung der mikroskopischen Analyse in A. Ausgewertet wurden 10
gleich große Mikroskopfelder. Die Ergebnisse sind Mittelwerte aus drei unabhängigen Experimenten.
(Maßstab 5 µm)
Wie im Überlagerungsbild gut zu erkennen ist, umgeben diese feinen peripheren Prozesse
sternförmig die Filopodien des aktivierten F-Aktins. Die radial angeordneten Strukturen sind
nicht gleichmäßig über die Oberfläche der T-Zellen verteilt, sondern sind nur am Ende der
flachen Membranausdehnungen lokalisiert wie die 3D-Rekonstruktion in Abb. 5.14.D zeigt.
In diesem planaren Bereich ist die Zelle im direkten, festen Kontakt mit den Plattengebundenen
Antikörpern und möglicherweise vermitteln die gebildeten Strukturen
Adhäsionsprozesse. Dagegen zeigen mit WTF inkubierte T-Zellen deutlich morphologisch
Unterschiede. Die F-Aktin Färbung WTF-behandelter Zellen in Abb. 5.14.B zeigt, wie bereits
in Abschn. 5.3. beschrieben, keine Ausbildung von Filopodien und gestörte Lamellipodien-
Formation. Des weiteren weist die Zelle keine Mikrovilli-ähnlichen Strukturen auf. Die
Signalintensität der phosphorylierten ERM-Proteine ist verglichen mit der der Kontrollzelle
ebenfalls reduziert. Nur etwa 20 % der WTF-behandelten Zellen bilden radial angeordnete
periphere Prozesse aus. Wahrscheinlich verursacht das Fehlen der Mikrovilli-ähnlichen
Strukturen die deutlich erniedrigte Adhärenz WTF-behandelter T-Zellen. Die zusätzlichen
Färbungen mit einem Ezrin-spezifischen Antikörper (Abb. 5.134.C) zeigen, dass Ezrin, ein
Bestandteil der ERM-Proteine in mock-behandelten Zellen in den Mikrovilli-ähnlichen
Strukturen lokalisiert bzw. in WTF-behandelten Zellen deutlich weniger ausgeprägt ist.
5.7.3. Rasterelektronenmikroskopische Analyse WTF-behandelter T-Zellen
Da Rho GTPasen und ERM-Proteine die Ausbildung von Mikrovilli regulieren, wurde
untersucht, ob die WTF-Bindung die Ausbildung dieser Strukturen verändert. Dafür wurden
T-Zellen mit mock bzw. WTF behandelt, entweder auf Poly-L-Lysin adhäriert oder durch
CD3/CD28 Ligation für 10 min costimuliert und mittels Rasterelektronenmikroskopie
analysiert. Die CD3/CD28 costimulierten Kontrollzellen in Abb. 5.15.A zeigen ausgeprägte
Lamellipodien-Strukturen mit radial angeordneten filopodialen Strukturen in den Randbereichen
(87 %).