Untersuchung des Einflusses von Maservirus auf ... - OPUS Würzburg
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(A)<br />
Cdc42<br />
CD3/CD28<br />
mock WTF<br />
C 5 10 20 C 5 10 20<br />
Cdc42-GTP<br />
Cdc42<br />
Rac1<br />
CD3/CD28<br />
mock WTF<br />
C 5 10 20 C 5 10 20<br />
Rac1-GTP<br />
Rac1<br />
RhoA<br />
mock WTF<br />
CD3/CD28 C 5 10 20 C 5 10 20<br />
RhoA-GTP<br />
RhoA<br />
(B)<br />
fold induction<br />
3<br />
2,5<br />
2<br />
1,5<br />
1<br />
0,5<br />
0<br />
unstim 5 min 10 min 20 min<br />
Cdc42<br />
Rac1<br />
RhoA<br />
cdc42<br />
rac1<br />
rhoA<br />
Abb. 5.5.: Analyse der GTP-Beladung <strong>von</strong> Cdc42, Rac1 und RhoA in CD3/CD28 stimulierten<br />
Zellen nach WTF-Bindung. (A) Mock- bzw. WTF-behandelte T-Zellen wurden durch CD3/CD28<br />
Ligation costimuliert, mit GTPase Lysepuffer lysiert, die gewonnen Lysate (Proteingehalt 300 µg) mit<br />
20 µg GST-Pak1 PDB bzw. 400 µg GST-RBD inkubiert, aktive GTPasen eluiert und durch Western<br />
Blotting mit einem spezifischen Antikörper detektiert. Zusätzlich wurden 20 µg der Zelllysate als<br />
Ladekontrolle <strong>auf</strong>getragen. (B) Quantitative Auswertung der WB Analyse in A.
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