Untersuchung des Einflusses von Maservirus auf ... - OPUS Würzburg

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5.7.1. WTF beeinflußt die Phosphorylierung von Membranlinkerproteinen
Zur Untersuchung der Phosphorylierung von ERM-Proteine wurden T-Zellen gemäß dem
beschriebenen Protokolle costimuliert. Anschließend wurden die Zellen unmittelbar in 2 x
SDS-Gelladepuffer in der Platte lysiert und die Proben über WB Analyse analysiert und mit
einem P-ERM spezifischen Antikörper detektiert (Abb. 5.13.). Zusätzlich zu stimulierten T-
Zellen wurden Lysate nicht-stimulierter Zellen untersucht. Da ERM-Proteine das Aktin-
Zytoskelett mit Membranrezeptoren verbinden, weisen nicht-stimulierte T-Zellen bereits
einen hohen Phosphorylierungsgrad auf, welcher nach Stimulation mit Chemokinen, CD3 und
durch APCs abnimmt (152, 153).
(A)
mock
WTF
C 5 15 30 60 C 5 15 30 60
CD3/CD28
P-ERM
Moesin
(B)
relative Aktivität
1,2
1
0,8
0,6
0,4
0,2
0
mock
WTF
Abb. 5.13.: Bindung von WTF an T-Zellen verändert die Phosphorylierung der Zytoskelett-
Linkerproteine ERM in CD3/CD28 stimulierten Zellen. (A) Mock- bzw. WTF-behandelte T-Zellen
wurden durch CD3/CD28 Ligation für die angegebenen Zeitpunkte costimuliert, durch Zugabe von 2 x
SDS-Gelladepuffer lysiert. Je 40 µl der Zelllysate wurden über ein 10 % SDS-PAGE Gel aufgetrennt
und mit einem P-ERM Antikörper durch Western Blot Analyse detektiert (75-80 kDa). Zusätzlich
wurden 40 µl pro Lysat als Proteinladekontrolle aufgetragen und mit einem Moesin Antikörper (75
kDa) nachgewiesen. (B) Quantitative Analyse des WB in A.