Manual de Metodos para el Programa de Monitoreo Sinoptico

Documento Técnico del SAM No. 4Manual de Métodos para Monitoreo Sinópticola muestra, a otro añada 1 ml, a un tercero añada 0.1 ml de la muestra, al cuarto 1 ml de la muestradiluida, y al último 0.1. De esta manera se tiene 10 ml, 1 ml, 0.1 ml, 0.01 ml y 0.001 ml de muestraen cada tubo. Mezcle cada tubo varias veces. Se deben preparar 5 tubos por cada dilución paracada muestra. Incube a 35 ± 0.5 °C durante 24 horas. Agite suavemente cada tubo y observe si seproduce gas o un color amarillo. En caso contrario incube por otras 24 horas y observe de nuevo.La aparición de gas o color amarillo a las 24 o 48 horas constituye una prueba presuntiva positiva.FASE CONFIRMATORIAREACTIVOSMedio de Verde Brillante En un litro de agua destilada disuelva calentando:10.0 g de peptona10.0 g de lactosa20.0 g de bilis de buey0.0133 g de verde brillanteEl pH debe ser de 7.2 ± 0.2 después de la esterilización. Coloque el medio en tubos defermentación con un vial invertido y esterilice en una autoclave.PROCEDIMIENTOInocule un tubo con el medio de verde brillante por cada muestra positiva de la fase presuntiva.Agite los tubos de la fase presuntiva que dieron resultados positivos, introduzca un asa estéril de 3mm de diámetro en el tubo presuntivo y rápidamente introdúzcalo en el tubo de verde brillante. Agitelos tubos e incube a 35 ± 0.5 °C durante 48 horas. La formación de gas a las 48 horas constituyeuna prueba confirmatoria.Calcule el valor del número más probable (NMP) a partir del número de tubos positivos. Consulte latabla que se proporciona en la siguiente sección.6.14 COLIFORMES FECALESREACTIVOSMedio EC En un litro de agua destilada disuelva calentando:20.0 g de tripticasa5.0 g de lactosa1.5 g de sales biliares4.0 g de fosfato ácido de potasio1.5 g de fosfato diácido de potasio5.0 g de cloruro de sodioEl pH debe ser de 6.9 ± 0.2 después de la esterilización. Coloque el medio en tubos defermentación con un vial invertido, ciérrelos con un tapón de metal o plástico resistente al calor.Esterilice los tubos en un autoclave. Se deben preparar 5 tubos por cada dilución para cadamuestra.PROCEDIMIENTOInocule un tubo con el medio EC por cada muestra positiva de la fase presuntiva de la prueba paracoliformes totales. Agite los tubos de la fase presuntiva que dieron resultados positivos, introduzcaun asa estéril de 3 mm de diámetro en el tubo presuntivo y rápidamente introdúzcalo en el tubo de94