Medicina.forense.Grandini.3ª.Ed

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Medicina forense
carbono 3 de la pentosa) con una marca fluorescente. Cuando la reacción de PCR incorpora
un didesoxinucleótido no puede continuar la elongación de la cadena, por lo que la reacción
final produce fragmentos de diferentes tamaños con la marca del último didesoxinucleótido
incorporado. Los fragmentos generados en la reacción de secuencia se analizan mediante
electroforesis capilar por tamaño y marca y permite determinar su secuencia (figura 13-8).
RFLP
Existen varios protocolos que consisten en digerir el DNA con enzimas de restricción que
producen tamaños diferentes, según sea la variación del genoma. Todos los protocolos tienen
el mismo objetivo: identificar la variación en tamaño de los fragmentos, que permiten diferenciar
a las entidades de estudio (individuos, poblaciones, otros). Gracias al desarrollo de
la técnica PCR con RFLP es posible dirigir los análisis de RFLP hacia regiones específicas
del genoma de un organismo; los fragmentos amplificados mediante PCR a partir de una
muestra de DNA se someten a restricción (corte) con enzimas endonucleasas, las cuales
EcoRI EcoRI EcoRI
Individuo 1
600 pb
200 pb
EcoRI
EcoRI
Individuo 2
Individuo 1
800 pb
Individuo 2
800 pb
Figura 13-9. RFLP. Mecanismo simplificado del ensayo: la endonucleasa restringe el DNA en sitios
específicos en cada individuo y genera fragmentos de tamaños diferentes que se visualizan
mediante la hibridación con sondas específicas.
600
200
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