Manuscrit_these_Mathieu _Cladiere_VF - LEESU

Chapitre II : Matériels et méthodes7.3 Extraction de la phase particulaire7.3.1 Phase de développement et validationa) Optimisation de la purificationAvant le commencement de ce travail, Gilbert (2011) avait mis au point une méthodepour extraire à la fois les alkylphénols et les polybromodiphényléthers de la phaseparticulaire. Cette méthode d’extraction par micro-onde couplée à une purification surcolonne de silice permettait d’extraire le 4-NP, le 4-t-OP et leurs dérivés éthoxylés(NP 1 EO, NP 2 EO, OP 1 EO et OP 2 EO), mais pas le BPA ou le NP 1 EC. En conséquence, aucours de ce travail, le protocole d’extraction a été optimisé pour permettre l’extraction etl’analyse simultanée de l’ensemble des composés ciblés.En accord avec les protocoles développés dans la littérature (Lara-Martin et al. 2006;Wang et al. 2011), des tests de purification sur cartouche SPE ont été menés. Pour cela quatrecartouches ont été sélectionnées, deux cartouches en phase normale : Chromabond ® PA(1 g / 6 mL, Macherey-Nagel) et Strata TM NH 2 (200 mg / 3 mL, Phénoménex), ainsi que deuxcartouches en phase inverse : Chromabond ® C 18 (500 mg / 3 mL, Macherey-Nagel) etOASIS ® HLB (200 mg / 6 mL, Waters). Pour chaque cartouche, un protocole spécifique pourles différentes étapes (conditionnements / lavages / élutions) a été appliqué comme décrit dansle Tableau II-16. Dans le cas de la cartouche Chromabond ® C 18 , Lara-Martin et al. (2006) ontmontré que les rendements de récupération en milieu acidifié étaient plus importants qu’enmilieu neutre. Cette cartouche a donc été testée dans ces deux conditions : pH neutre etacidifié à pH≈2 (Tableau II-16).Tableau II-16 : Protocoles de purification pour les cartouches étudiéesCartouches Conditionnements 1 Conditionnements 2 Echantillons Lavages ElutionsPA(1 g/6 mL)Strata TM NH 2a(200 mg/3 mL)C 18 (500 mg/3 mL)pH ≈ 2 aC 18 (500 mg/3 mL)pH neutreOASIS ® HLB(200 mg/6 mL)3 mL MeOH 3 mL heptane 500 µL heptane -3 mL MeOH3 mL MeOH3 mL MeOH3 mL MeOH3 mL MeOH/H 2O20/80 (v/v)3 mL MeOH/H 2O20/80 (v/v)3 mL MeOH/H 2O20/80 (v/v)3 mL MeOH/H 2O20/80 (v/v)500 µL MeOH/H 2O50/50 (v/v)500 µL MeOH/H 2O50/50 (v/v)500 µL MeOH/H 2O50/50 (v/v)500 µL MeOH/H 2O50/50 (v/v)-3 mL H 2O3 mL H 2O3 mL H 2O9 mL MeOH/DCM50/50 (v/v)9 mL MeOH/DCM50/50 (v/v)9 mL MeOH/DCM50/50 (v/v)9 mL MeOH/DCM50/50 (v/v)9 mL MeOH/DCM/EtAce40/40/20 (v/v/v)a : Pour Strata TM NH 2 , les conditionnements et échantillons sont réalisés à pH ≈ 8, élution à pH ≈ 2b : Pour C 18 pH ≈ 2, tous les solvants sont utilisés à pH ≈ 2.Pour la plupart des cartouches, après l’étape de conditionnement, les échantillons sontrepris dans 500 µL d’un mélange MeOH/H 2 O (50/50, v/v) (sauf PA : 500 µL heptane) puisdéposés en haut de la cartouche. Puis, seules les cartouches en phase inverse (C 18 et OASIS ®HLB) sont rincées avec 3 mL d’eau ultrapure avant élution avec 9 mL d’un mélangeMeOH/DCM (50/50, v/v) sauf pour OASIS ® HLB qui est éluée comme pour l’extractiondissoute avec un mélange MeOH/DCM/EtAce (40/40/20, v/v/v).La première étape des tests des rendements de récupération des cartouches SPE a étéeffectuée sans matrice environnementale, à partir de 100 µL d’une solution d’étalons deréférence de concentration identique à celle utilisée pour la phase dissoute (Tableau II-14).Les rendements ont été déterminés en triplicat pour chaque cartouche, à partir de la différenceentre les concentrations mesurées et théoriques (Figure II-10).99