MICROBIOLOGIA prof. Antonio Farris - AgrariaFree

L’esame microscopico dei microrganismi si basa sull’uso del microscopio ottico(nelle applicazioni
di routine) e di quello elettronico (per studi più dettagliati).
Oltre all’ ingrandimento è importante la risoluzione, cioè la capacità di mostrare due punti
adiacenti come distinti.
Sebbene l’ingrandimento possa essere aumentato a piacere, la risoluzione è invece limitata e
dipende dalle caratteristiche fisiche della luce.
La risoluzione del microscopio ottico è circa 0.2mm, invece il microscopio elettronico ha una
risoluzione di circa 1000 volte superiore.
Si utilizzano vari tipi di microscopi ottici: in campo chiaro, a contrasto di fase, in campo scuro e a
fluorescenza.
Il microscopio in campo chiaro consiste di 2 serie di lenti (obiettivo e oculare) che lavorano
insieme per definire l’immagine; la visualizzazione dei campioni avviene grazie alle differenze di
contrasto esistenti tra gli stessi e il mezzo circostante e dovute alla capacità delle cellule di assorbire
o disperdere in varia misura la luce.
L’ingrandimento di un preparato microscopico è dato dal prodotto degli ingrandimenti
dell’obbiettivo e dell’oculare.
Il valore massimo di ingrandimento ottenibile con un microscopio ottico è di 1500 volte e mi
permette di osservare i mm 1/1000 del mm, mentre con un microscopio elettronico è
possibile ottenere ingrandimenti di 1000 volte maggiori (distinguo i nm . un milionesimo del
mm).
Per aumentare il limite di risoluzione di preparati ad elevato ingrandimento è consigliato l’uso
di olio per lenti a immersione da interporre tra l’obiettivo e il preparato, che aumenta la capacità di
raccolta della luce da parte di una lente.
Uno dei limiti della microscopia in campo chiaro è certamente il contrasto.
I coloranti usati per colorare le cellule hanno la funzione di migliorare il contrasto rendendo
visibile al meglio il preparato; i coloranti sono composti organici con affinità per specifici
componenti cellulari e ne sono un esempio il blu di metilene, il cristal violetto e la safranina.
Invece i coloranti differenziali non colorano in maniera uguale tutti i tipi di cellule e tra questi è
ampiamente utilizzata la colorazione di Gram.
I batteri sono suddivisi in Gram + (si presentano colorati in viola) e Gram - (colorati in rosso); la
diversa reazione alla colorazione di Gram è dovuta a differenze strutturali nella parete cellulare,
per cui l’etanolo è in grado di decolorare un batterio Gram - ma non un Gram + .
Per l’identificazione di un batterio sconosciuto è indispensabile stabilire per prima cosa se esso sia
Gram + o Gram - (tramite il microscopio a fluorescenza la procedura sarebbe molto più rapida).
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