com as técnicas de FISH, CMA, DAPI - IAC

A técnica de hibridização in situ fluorescente (fluorescense in situ hybridization
- FISH) difere da anterior HIS por utilizar corantes fluorescentes para detectar os
nucleotídeos marcados da sonda. Nesta técnica podem ser usadas como sonda,
sequências únicas ou repetitivas (organizadas em tandem) ou ainda o DNA genômico
total de um organismo, neste caso denominando-se a técnica de GISH (genomic in situ
hybridization). Essa técnica vem sendo utilizada na construção de mapas físicos de
cromossomos, na análise e investigação da estrutura, função e evolução dos
cromossomos, e na detecção de genomas (LEITCH et al., 1994).
As sondas mais comumente utilizadas são aquelas de sequências repetitivas por
serem mais facilmente detectadas e por isto proporcionam sinais mais evidentes. Das
sondas de sequências repetitivas, uma das mais aplicadas são as sequências de rDNA
45S e 5S. A sonda de rDNA conhecida como pTa71 possui 9,0 Kb e corresponde à
sequência de DNA ribossômico de Triticum aestivum, que abrange as regiões 28S, 5.8S
e 26S e foi clonada no plasmídeo pUC19 (GERLACK & BEDBROOK, 1979) e a sonda
de rDNA 5S conhecida como pScT7 corresponde à sequência de DNA ribossômico 5S
isolada de Secalle cereale, possui 300-500 pb e foi clonada no plasmídio pUC8,
(LAWRENCE & APPELS, 1986).
Com a finalidade de construir uma árvore filogenética ADAMS et al. (2000)
usaram a técnica de FISH para verificar a distribuição das sequências de rDNA 5S e
18S-5.8S-26S em 13 espécies de Aloe (Asphodelaceae). As espécies possuem vários
níveis de ploidia, estão distribuídas em várias regiões geográficas e apresentam uma
gama de tipos morfológicos diferentes. Os autores constataram que a distribuição de
sinais de rDNA 5S era semelhante em posição em todas as espécies analisadas, já a
distribuição de sítios de rDNA 18S-5.8S-26S mostrou-se instável e variável em número,
localização e tamanho. Os resultados demonstraram claramente que essa região de
rDNA 45S mudou ao longo da especiação nesse grupo de plantas.
A fim de determinar a variabilidade de sítios de rDNA 5S e 45S em 20 espécies
de Passiflora com vários níveis de ploidia, MELO & GUERRA (2003) usaram a técnica
de hibridação in situ com sondas de rDNA 5S e 45S para investigar a origem da
variação do número cromossômico básico, propostos para o gênero como sendo x = 6,
com x = 9, x = 10 e x = 12. O número e a localização dos sítios de rDNA 5S e 45S
foram consistentes com a hipótese de x = 6 ser o provável genoma ancestral para o
gênero.
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