com as técnicas de FISH, CMA, DAPI - IAC

4.1.4 Hibridação in situ fluorescente (FISH)
A hibridação in situ (FISH), com a sonda pTa71, ou sequência de rDNA 45S,
nos cromossomos de A. cunha resultou na identificação de vinte e três sítios,
distribuídos entre os 8 pares de cromossomos (Figura 5C).
No par 1 metacêntrico foram identificados dois sinais, cada um deles localizados
nas regiões terminais dos diferentes braços. Este par apresentou-se dimórfico em relação
a um destes sinais que foi observado em apenas um dos cromossomos do par (Figuras
5C – seta e 16A).
O par cromossômico 2 caracteriza-se por apresentar 3 sinais, o maior número de
sítios de hibridação de rDNA 45S registrado para esta espécie. Neste cromossomo o
sinal terminal do braço maior apresenta-se geralmente como sinal quádruplo, ou seja,
um sinal em cada uma das cromátides já duplicadas (cromonemas) (Figuras 5C e 6C).
Todos os cromossomos telocêntricos (pares 3, 4, 5, 6) apresentam sinais de hibridação
na região centromérica, com exceção do par 3 que apresenta adicionalmente um sinal na
extremidade do braço longo. No par 4 o sítio de hibridação para a sequência 45S se
apresenta polimórfico, com tamanhos diferentes nos cromossomos homólogos (Figuras
5C, 6C, 6E e 16A). Os pares 7 e 8 apresentam igualmente os sinais de hibridação
exatamente na região do centrômero, sendo que o sinal do par 8 é extremamente
pequeno e comparativamente igual em tamanho a um dos sinais do par 4.
O uso da sonda pScT7 resultou na visualização de sítios de hibridação em três
pares cromossômicos. No par cromossômico metacêntrico 1 os sinais estão situados na
região terminal de um dos braços. Nos pares cromossômicos 2 (submetacêntricos) e 3
(telocêntricos) os sinais estão localizados nas regiões centroméricas, sendo o sítio de
hibridação do par 2, extremamente pequeno e de difícil visualização (Figura 5D - seta).
A aplicação de FISH com sequências de rDNA 45S e 5S é inédita para esta espécie.
4.1.5 Bandamento AgNOR
Com relação ao bandamento com nitrato de prata para a espécie A. cunha, a
visualização de bandas indicadoras de regiões NOR foi positiva em poucas células.
Nestas células, embora com bandas visíveis, não foi possível definir o número e a
localização exata das mesmas nos respectivos cromossomos. Verificou-se apenas que
são numerosas (Figuras 17A e 17B). Este resultado também é inédito para esta espécie.
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