com as técnicas de FISH, CMA, DAPI - IAC

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SUMÁRIO ÍNDICE DE TABELAS............................................................................................. viii ÍNDICE DE FIGURAS.............................................................................................. ix RESUMO................................................................................................................... xii ABSTRACT............................................................................................................... xiv 1 INTRODUÇÃO...................................................................................................... 01 2 REVISÃO DE LITERATURA............................................................................... 03 2.1 Aspectos econômicos do gênero Alstroemeria L................................................. 03 2.2 Caracterização botânica da família Alstroemeriaceae......................................... 04 2.3 Espécies do gênero Alstroemeria estudadas........................................................ 08 2.3.1 Alstroemeria cunha Vell................................................................................... 08 2.3.2 Alstroemeria inodora Herb............................................................................... 08 2.3.3 Alstroemeria longistaminea Mart. ex Schult. & Schult.f.................................. 08 2.3.4 Alstroemeria psittacina Lehm........................................................................... 09 2.4 Estudos citogenéticos para o gênero Alstroemeria L........................................... 09 2.5 Coloração com Giemsa........................................................................................ 13 2.6 Bandamento com corantes fluorescentes - CMA3 e DAPI.................................. 15 2.7 Hibridação in situ................................................................................................. 18 2.8 Bandamento cromossômico com nitrato de prata – AgNOR............................. 23 3 MATERIAL E MÉTODOS.................................................................................... 25 3.1 Material................................................................................................................ 25 3.2 Métodos................................................................................................................ 28 3.2.1 Germinação de sementes................................................................................... 28 3.2.2 Pré-tratamento de raízes e fixação.................................................................... 28 3.2.3 Hidrólise e preparações citológicas................................................................... 28 3.2.4 Microscopia e análise das imagens................................................................... 29 3.2.5 Coloração com Giemsa..................................................................................... 29 3.2.6 Bandamento com CMA3/DA (Cromomicina A3/distamicina).......................... 30 3.2.7 Bandamento com DAPI/AMD (4‟-6-diamidino-2-fenilindol/actinomicina D) 30 3.2.8 Bandamento com nitrato de prata - AgNOR..................................................... 31 3.2.9 Hibridação in situ fluorescente......................................................................... 32 3.2.9.1 Sondas............................................................................................................ 32 3.2.9.2 Hibridação molecular in situ de sondas de DNA ribossomais de 45S e 5S... 32 3.2.10 Medidas dos cromossomos............................................................................. 33 4 RESULTADOS....................................................................................................... 34 4.1 Alstroemeria cunha.............................................................................................. 34 4.1.1 Microscopia de fase e coloração com Giemsa.................................................. 34 4.1.2 Bandamento CMA3/DA.................................................................................... 34 4.1.3 Bandamento DAPI/AMD.................................................................................. 34 4.1.4 Hibridação in situ fluorescente (FISH)............................................................. 36 4.1.5 Bandamento AgNOR........................................................................................ 36 4.1.6 Medidas cromossômicas................................................................................... 37 4.2 Alstroemeria inodora........................................................................................... 39 4.2.1 Microscopia de fase e coloração com Giemsa.................................................. 39 4.2.2 Bandamento CMA3/DA.................................................................................... 39 4.2.3 Bandamento DAPI/AMD.................................................................................. 40 4.2.4 Hibridação in situ fluorescente (FISH)............................................................. 41 4.2.5 Bandamento AgNOR........................................................................................ 42 vi
4.2.6 Medidas cromossômicas................................................................................... 43 4.3 Alstroemeria longistaminea................................................................................. 44 4.3.1 Microscopia de fase e coloração com Giemsa.................................................. 44 4.3.2 Bandamento CMA3/DA.................................................................................... 46 4.3.3 Bandamento DAPI/AMD.................................................................................. 46 4.3.4 Hibridação in situ fluorescente (FISH)............................................................. 46 4.3.5 Bandamento AgNOR........................................................................................ 47 4.3.6 Medidas cromossômicas................................................................................... 49 4.4 Alstroemeria psittacina........................................................................................ 50 4.4.1 Microscopia de fase e coloração com Giemsa.................................................. 50 4.4.2 Bandamento CMA3/DA.................................................................................... 50 4.4.3 Bandamento DAPI/AMD.................................................................................. 50 4.4.4 Hibridação in situ fluorescente (FISH)............................................................. 51 4.4.5 Bandamento AgNOR........................................................................................ 52 4.4.6 Medidas cromossômicas................................................................................... 53 5 DISCUSSÃO.......................................................................................................... 58 6 CONCLUSÕES...................................................................................................... 68 7 REFERÊNCIAS...................................................................................................... 69 vii
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