com as técnicas de FISH, CMA, DAPI - IAC

obtidos por emissão foram analisados no microscópio de fluorescência com filtros
apropriados e as imagens capturadas conforme descrito no item 3.2.4.
Como as duas sondas foram marcadas com digoxigenina, e detectadas com anti-
digoxigenina com FITC ambas resultaram em sinais que foram visualizados na cor
verde. Para uma melhor distinção dos sinais correspondentes às duas sondas, alterou-se,
através do software Image-ProPlus, a cor do sinal visualizado para a sonda pTa71 como
sendo correspondente à cor vermelha do fluorocromo Cy3.
3.2.10 Medidas dos cromossomos
Para a obtenção das medidas dos cromossomos foi usado o programa
MicroMeasure versão3.3 (MM) próprio para análises das medidas cromossômicas e
disponibilizado no site http://www.colostate.edu/Depts/Biology/MicroMeasure pelo
departamento de Biologia da Colorado State University (REEVES & TEAR, 2000;
REEVES, 2001). A partir de imagens capturadas pelo analisador de imagens os
cromossomos foram medidos em 10 células de cada espécie, sendo utilizado como
padrão a média da medida dos pares cromossômicos e dos braços, incluindo a posição
centromérica. A nomenclatura para a morfologia cromossômica adotada foi a de
LEVAN (1964) e os pares cromossômicos foram alinhados pelos centrômeros e
numerados em ordem decrescente de tamanho.
Para a caracterização do cariótipo foram utilizadas medidas dos CTC
(comprimento total de cromatina), calculado mediante somatória do tamanho individual
de todos os cromossomos, IC (índice centromérico) de cada par cromossômico
calculado de acordo com LEVAN (1964), e do índice TF% (índice de assimetria)
calculado de acordo com HUZIWARA, (1962). Também foi calculado o número
fundamental (número de braços cromossômicos no complemento cromossômico), de
acordo com MATTHEY (1945) e o coeficiente de variação da média dos pares
classificados segundo GOMES (2000).
Os cariogramas foram montados a partir das imagens capturadas em contraste de
fase as quais foram editadas com o programa Corel Draw. Os ideogramas foram feitos
com o uso do programa Microsoft Word com base nas médias das medidas dos braços
dos cromossomos.
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