Considerações finais - Repositório Institucional da UFSC

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tubo de ensaio contendo 2,725 mL de tampão fosfato de sódio 0,05 M a
pH 4,7, 0,1 mL da solução de peróxido de hidrogênio 0,2M e 0,1mL da
solução de guaiacol 0,1 M preparada em solução de Tween 80 0,1%, foi
mantido em banho termostatizado (“Personal Shaker”, Taiyo Kagaku
Kogyo Co., Japão) a 25 o C. Foi adicionado 25 µL do extrato enzimático
e a absorbância foi monitorada durante o período de fase linear. Uma
unidade de atividade de POD foi definida como a quantidade da enzima
necessária para produzir 1 µmol de tetraguaicol a partir do guaiacol por
minuto, nas condições estabelecidas. O coeficiente de absortividade
molar da tetraguaiacol utilizado, para transformar os valores de
absorbância em moles de tetraguaiacol foi 32800 M -1 cm -1 (CENI, 2008).
Os valores obtidos foram utilizados para o cálculo da atividade residual.
2.6 Determinação de proteínas totais
A quantificação das proteínas no extrato enzimático bruto foi
realizada de acordo com o método de Kjeldahl (N x 5,25), Association
of Official Analytical Chemists (AOAC, 2005)
2.7 Testes preliminares de inativação enzimática
A definição das faixas de temperatura e de sapeco a serem
utilizadas nos ensaios foi estabelecida através de testes preliminares,
com o objetivo de obter condições aceitáveis de temperatura e de tempo
para reduzir a atividade enzimática residual da POD a 10 %, sem
provocar queima das folhas. Esse percentual de atividade residual foi
adotado, com base no estudo realizado por Provesi et al. (2010), que
encontraram maior retenção da cor verde da erva-mate em valores de
atividade residual de POD de 5,4 % e 7,3 %, sem a geração de de
HPAs.
As temperaturas de ensaio para a inativação enzimática foram
selecionadas com base no estudo de Provesi et al. (2010), que avaliaram
a inativação térmica das enzimas POD e PFO de folhas de erva-mate em
forno mufla. As atividades enzimáticas residuais da POD e PFO e os
parâmetros de cor L, a* e b* das folhas de erva-mate foram avaliados
imediatamente após os tratamentos térmicos e por um período de 21 dias
com análises em intervalo de 7 dias. Os tratamentos térmicos foram
realizados em temperaturas variando de 350 a 500 o C e tempos variando