ANAIS VI CONGRESSO DE INICIAÇÃO CIENTÍFICA DO PIBIC/UMC ...

Interação dos glicosaminoglicanos com a cisteíno-proteinase CPB 2.8 CTE
recombinante de Leishmania mexicana
Bolsista: Maíra Rupolo Koshiba (Curso de Biologia)
Orientador: Ivarne Luis dos Santos Tersariol
[INTRODUÇÃO] A sobrevivência da forma amastigota do parasita Leishmania
mexicana nos macrófagos do hospedeiro, bem como a virulência do parasita é
dependente de uma cisteíno-proteinase, a enzima CPB2.8 ∆CTE. Os
glicosaminoglicanos (GAGs) são glicoconjugados ubíquos da superfície celular de
células animais e regulam a interação das células com o seu meio. Assim sendo, a
interação desta proteinase com os GAGs do hospedeiro pode modular a atividade dessas
enzimas e controlar processos de virulência e patogenicidade do
parasita.[METODOLOGIA] As interações dos GAGs com a enzima recombinante,
CPB2.8 ∆CTE, e suas mutantes foram monitoradas pela hidrólise enzimática de
substratos fluorescentes em função do pH e pela alteração da fluorescência intrínseca
das enzimas.[RESULTADOS] Dentre os vários GAGs testados, somente a heparina e o
heparam sulfato foram efetivos na interação com a enzima CPB2.8 ∆CTE. Os resultados
mostram que a presença de heparina não deslocou o valor de pH ótimo da enzima.
Contudo, foi verificado que a presença de heparina resultou numa diminuição 12 vezes
no valor de k cat da enzima, bem como, promoveu uma diminuição de 9 vezes na
constante de dissociação do substrato. Também foi observado que a presença de
heparina é capaz de perturbar a fluorescência intrínseca das enzimas. Ainda, a interação
da heparina com a enzima CPB2.8 ∆CTE foi sensível às mutações dos resíduos dos
aminoácidos D61, D64 e H84.[CONCLUSÃO] Esses resultados claramente mostram
que a heparina é capaz de interagir e promover alteração estrutural na enzima CPB2.8
∆CTE de L. mexicana.