Multiple Defekte der Hämatopoese und T ... - bei DuEPublico

Lysis-Puffer 100 mM NaCl
50 mM Tris-HCl pH 8,0
80 mM EDTA pH 8,0
0,2 % (w/v) SDS
Proteinase K-Lsg. 0,1 mg/ml Proteinase K
5.3.3 Konzentrationsbestimmungen von Nukleinsäuren
Die Konzentration von Nukleinsäuren wurde spektrophotometrisch in einer Quarzküvette bei
einer Wellenlänge von λ = 260 nm bestimmt. Dabei entsprachen:
1 OD260 = 50 µg/ml für doppelsträngige DNA
1 OD260 = 40 µg/ml für einzelsträngige DNA oder RNA
1 OD260 = 20 µg/ml für Oligonukleotide
5.3.4 Auftrennung von Nukleinsäuren im Agarosegel
Zur Auftrennung restriktionsverdauter DNA wurden horizontale 0,8 - 1,6 %ige Agarosegele
mit 0,05 µg/ml Ethidiumbromid und mit 1x TAE als Laufpuffer verwendet. Zu den Proben
wurde entsprechend ihres Volumens 5x Probenpuffer gegeben und bei 50-120 V
elektrophoretisch 1-12 h aufgetrennt. Über das interkalierende Ethidiumbromid konnte die
DNA unter UV-Licht direkt sichtbar gemacht und gegebenenfalls dokumentiert werden. Die
Auftrennung genomischer DNA erfolgte bei 20 V über Nacht
TAE 40 mM Tris-Acetat, pH 7,8
2 mM EDTA
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