Multiple Defekte der Hämatopoese und T ... - bei DuEPublico

85 % zu 15 % gesetzt und die dazugehörigen Marker auf das Histogramm der DN3 Zellen aus
dem Knock-out Thymus übertragen. Daraus ergibt sich eine Erhöhung der L-Zellpopulation in
dem gezeigten Beispiel, aus der auf eine vermehrte Expansion von Zellen nach der β-Selektion
geschlossen werden kann. Da die Größe allein kein sicheres Kriterium für die Proliferation
darstellt, wurden die Zellen in einem zusätzlichen Ansatz mit Hoechst 33382 gefärbt und das
DNA Profil der DN3 Zellen dargestellt. Diese Analyse bestätigt die erhöhte Anzahl an L-
Zellen und weist einen größeren Prozentsatz an proliferierenden Zellen in der DN3 Population
der Gfi-1 defizienten Tiere aus (siehe Abb. 19b). Gleichzeitig zeigen aber auch beide
Parameter, Vorwärtsstreulicht und DNA-Färbung, eine deutlich erhöhte Zahl an apoptotischen
Zellen bei DN3 Thymozyten der Gfi-1 Knock-out Tiere (2.4.3). Da der β-Selektion bereits
ein Expansionsschritt vorausgeht und zwar in der DN1 Population, wurden diese Zellen in die
Analyse der Proliferation mit einbezogen. Dazu wurden die c-Kit + Thymozyten elektronisch
ausgewählt und deren Zellzyklusverteilung durch Hoechst 33382 Färbung abgebildet (Abb.
19.c). Im Gegensatz zur DN3 Population zeigen die c-Kit + Zellen aus wt Tieren einen
erheblich größeren Anteil an proliferierenden Zellen im Vergleich zu dem Gfi-1 -/- Tier.
a
b
c
+/+ -/-
8%
12%
17%
Hoechst 33382
47
2%
15%
3%
gesamt
DN3
c-Kit +