Multiple Defekte der Hämatopoese und T ... - bei DuEPublico

a
b
+/+ -/-
49 5
23 23
15%
CD44
FSC
Abb 18.: Analyse der DN Subpopulationen von Thymozyten
a: Einzelzellsuspensionen von Thymozyten aus Gfi-1 +/+ und Gfi-1 -/- Tieren wurden mit anti-CD44-FITC, anti-
CD25-PE, anti-CD3/4/8-TriColor konjugierten Antikörpern gefärbt. Gezeigt ist das CD44/CD25
Expressionsprofil elektronisch markierter CD3 - CD4 - CD8 - Thymozyten. Über die differentielle Expression von
CD25/CD44 erfolgt die Unterteilung der DN Zellen in vier Subpopulationen entsprechend den eingezeichneten
Quadranten. Die Zahlen im Kreuz geben die prozentuale Verteilung dieser vier Populationen wieder. Der Pfeil
weist auf eine nur bei Gfi-1-defizienten Mäusen auftretende neue Population innerhalb der DN1 Zellen hin.
b: Zusätzliches elektronisches Markieren der CD25 + CD44 - DN3 Population und Darstellung deren
Größenverteilung über den FSC. Die unterschiedliche Größe der DN3 Zellen erlaubt eine weitere Unterteilung in
E- und L-Zellen. Der Bereich der L-Zellen wurde elektronisch markiert und der prozentuale Anteil an der DN3
Population angegeben. Gezeigt sind repräsentative Darstellungen unabhängiger Messungen von jeweils sechs
Mäusen.
Der Prozeß der β-Selektion ist einer der entscheidenden Differenzierungsschritte während der
T-Zellentwicklung. Die beobachtete Reduktion der DN3 Zellen sagt aber noch nicht aus, ob
dieser Schritt durch den Verlust an Gfi-1 betroffen ist. Da die nachfolgenden Populationen
reife TCR tragen, erscheint es unwahrscheinlich, daß die V(D)J Rekombination an sich
verändert ist. Mit der β-Selektion einher geht aber auch ein Proliferationsschritt, der der
Expansion β-selektierter Zellen dient. Zur Analyse dieses Schrittes wurden DN3 Zellen in
Abb. 18.a wieder elektronisch markiert und deren Größenverteilung über das
Vorwärtsstreulicht in einem Histogramm dargestellt (Abb. 18.b). Entsprechend der Publikation
von Hoffman et al., 1996 wurde bei der wt Probe die Verteilung zwischen E- und L-Zellen auf
46
34 4
27 34
23%
DN3 DN2
DN4 DN1
DN3