Interaktion von Masernviren mit Dendritischen Zellen - OPUS ...

Ergebnisse 104
4.2 Untersuchungen zur Rolle von DC-SIGN als Rezeptor für
Masernviren
4.2.1 Rekombinantes DC-SIGN interagiert mit WTF und ED
Die Untersuchungen zur Rolle von DC-SIGN als Rezeptor für MV wurden
zunächst mit rekombinantem DC-SIGN durchgeführt. Das dazu verwendete
Konstrukt besteht aus dem extrazellulären Teil von DC-SIGN, das mit dem Fc-
Teil eines humanen IgG-Konstrukts fusioniert und rekombinant in CHO-Zellen
produziert wurde (Fawcett et al., 1992).
Für den durchgeführten Fc-Bindungstest wurden ELISA-Platten mit MV-
spezifischen Antikörpern gekoppelt und zunächst mit UV-inaktivierten Viren
(WTF und ED) und darauffolgend mit rekombinantem DC-SIGN-Fc inkubiert.
Die Bindung von DC-SIGN wurde mit Hilfe einer Peroxidase-gekoppelten
Reaktion anhand der Zunahme der optischen Dichte bei einer Wellenlänge von
450 nm bestimmt. Die Ergebnisse der Virusbindung an rekombinantes
DC-SIGN sind in Abbildung 4—16 dargestellt.
Wie aus der Abbildung 4—16 hervorgeht, bindet sowohl der Vakzinestamm ED
(A) als auch das Wildtypvirus WTF (B) an rekombinantes DC-SIGN. Je höher
die Menge an eingesetztem Virus, desto stärker ist die Zunahme der optischen
Dichte. Die Veränderung der optischen Dichte, und damit die Bindung an DC-
SIGN, ist bei den verwendeten Viren in etwa gleich. Die Bindung an DC-SIGN
konnte durch den Einsatz des DC-SIGN Liganden Mannan und des
Calciumchelators EGTA deutlich reduziert werden. Dies zeigt die Spezifität der
Bindung. Als Kontrolle wurde eine Fc-Chimäre mit identischer Fc-Domäne
verwendet (ICAM-3-Fc).