Interaktion von Masernviren mit Dendritischen Zellen - OPUS ...

Methoden 51
Gradienten wurden für 30 Minuten bei 400 x g, Raumtemperatur (RT) mit
zweiminütigem An- und Ablauf zentrifugiert. Die entstandenen Interphasen
wurden geerntet und in 50-ml-Röhrchen überführt; die Röhrchen wurden mit
Ca 2+ /Mg 2+ -freiem PBS aufgefüllt und für 10 Minuten bei 300 x g (RT)
zentrifugiert. Die pelletierten Zellen wurden weitere zwei- bis drei Mal
gewaschen. Zur Zellzahlbestimmung (3.1.3) und durchflusszytometrischen
Charakterisierung wurden vor dem letzten Waschen 200 Mikroliter der
Zellsuspension abgenommen. Die verschiedenen Interphasen wurden mit
einem Gemisch verschiedener monoklonaler Antikörper (CD3-FITC, CD14-
FITC, CD19-FITC, CD16-PE, CD56-PE und HLA-DR-PerCP) gefärbt (3.7.1)
und im Durchflusszytometer untersucht. Abschließend wurde die Fraktion der
Monozyten (CD14 + ) mit Einfriermedium gemischt, in Kryoröhrchen alitquotiert
und eingefroren (3.1.4).
CD16/CD56-PE
SSC
FSC
CD3/CD14/
CD19-FITC
HLA-DR-PerCP
CD3/CD14/
CD19-FITC
HLA-DR-PerCP
Abbildung 3—3 Durchflusszytometrische Charakterisierung der Monozytenpopulation (Monozyten:
R5 bzw. R6)
CD16/CD56-PE