Metabolomanalyse zur Untersuchung der Dynamik im ...

Tabelle 5.10.: Methodenparameter des Triple Quadrupol MS
5.4. Intrazelluläre Analytik
MS–Fluss 100 µLmin −1
Ionenquelle ESI
Sheath gas 50 Einheiten Stickstoff
Auxiliary gas 15 Einheiten Stickstoff
Capillary Voltage 4,0 kV
Capillary Temp 375 ◦ C
MS Scan Modus multiple reaction monitoring (MRM)
Polarität negativ (–)
Datentyp centroid
ESI Parameter Optimierung durch 10 µL Schleifeninjektion (manuell)
Tube Lens Offset automatische Software Optimierung nach manueller 10 µL
Schleifeninjektion mit G6P
MS Kalibrations–Parameter automatische Software Tuning Routine mit Polytyrosin Lösung
MS 2 –Kollisionsenergien automatische Software Optimierung unter Verwendung
der auto–loop injection Software Option
Q2 Kollisionsgas Argon 1,5 mTorr
Isolierungsbreite 1.5 amu (atomic mass unit)
Scan Zeit 150 ms je SRM
Q1 + Q3 Peakbreite 0.7 amu
MS–Ventilschaltung MS (0–13,5 und 20–40 min); Verwurf (13,5–20 und 40–60 min)
energien wurden durch Injektion aus einer 10 µL Probenschleife mit einer Standard–Lösung
(Eluent A 98 %, Eluent B 2 %) unter Verwendung der auto–loop injection Software Option
bestimmt. Die Optimierung der tube lens offset Spannung wurde nach manueller Injektion
aus der 10 µL Probenschleife mit einer 100 µM G6P Standard–Lösung (Eluent A 98 %,
Eluent B 2 %) von der Software automatisch durchgeführt. Obwohl die tube lens offset
Spannung einen massenabhängigen Parameter darstellt, wird die Optimierung nur für eine
Masse durchgeführt, da die Software eine entsprechende Korrektur für die Transmission
anderer Massen automatisch vornimmt.
Um unnötige Verunreinigungen vom Detektor fernzuhalten, wurden die zeitlichen Abschnitte
von 13.5–20 und von 40–60 Minuten des chromatographischen Laufes direkt verworfen.
Dazu wurde das am Gerät integrierte schaltbare Mehrwege–Ventil benutzt. Tab. 5.10
gibt eine Übersicht über die MS Methodenparameter, die substanzspezifischen MS/MS Parameter
sind in Tab. 5.11 dargestellt. Die Kalibrierung des TSQ Quantum Massendetektors
erfolgte entsprechend den Vorgaben des Herstellers unter Verwendung einer Poly–Tyrosin
Kalibrationslösung (Tyr, Tyr3, Tyr6). Zur Überprüfung der Kalibration und der spezifizierten
Empfindlichkeit des Detektors wurden Schleifeninjektionen mit Reserpin als Referenzsubstanz
unter den vom Hersteller vorgegebenen Standardbedingungen durchgeführt.
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