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x i i c o n f e r ê n c i aMCCUE, P. M. Transferência de Embriões em Equinos – Avaliação do Embrião / Revista de Educação Continuada em Medicina Veterinária e Zootecnia do CRMV-SP / Journal ofContinuing Education in Animal Science of CRMV-SP. São Paulo: Conselho Regional de Medicina Veterinária, v. 9, n. 3 (2011), p. 80–83, 2011.Transferência deembriões em equinos:avaliação do embrião 1IntroduçãoOs profissionais que trabalham com transferênciade embriões em equinos devem ser capazesde identificar e avaliar adequadamente osembriões. A avaliação do estágio de desenvolvimento,da qualidade e do tamanho dos embriõesé fundamental e a capacidade de diferenciarembriões de ovócitos não fertilizados (UFOs) eestruturas não embriônicas que possam vir a sercoletadas durante o procedimento de lavagemtambém é importante.O objetivo deste artigo é revisar os estágios dedesenvolvimento do embrião equino e a sua classificaçãoquanto ao escore de qualidade ou grau.Materiais e métodosA detecção de um embrião na placa deve serseguida de um procedimento sistemático de avaliação.Esse procedimento costuma ser rápido,mas há ocasiões em que a diferenciação entre umembrião, um ovócito não fertilizado e uma estruturanão embriônica pode levar vários minutos. Aavaliação deve englobar o estágio de desenvolvimento,o escore de qualidade (grau) e o tamanho.Um microscópio de boa qualidade, munidode um micrômetro para mensuração do diâmetrodo embrião, é fundamental para uma avaliação adequada.Antes da avaliação, os embriões são lavados em 3 ou maisgotas de meio de lavagem ou meio de manutenção. O fluidoinicial de lavagem contido na placa pode ter uma quantidadesignificativa de debris celulares e o objetivo é transferiro embrião deste meio inicial, removendo sequencialmentea maior quantidade possível de debris durante o procedimentode lavagem. Uma vez concluído o procedimento delavagem, o embrião é mantido no meio de manutenção eavaliado antes da sua transferência, transporte para outrolocal para transferência futura ou criopreservação.Foi realizada uma análise retrospectiva do escore dequalidade ou grau de 623 embriões coletados no Laboratóriode Reprodução Equina da Universidade do Colorado.ResultadosOs estágios de Desenvolvimento do embrião equinoestão dispostos na Tabela 1.Ovócitos não fertilizados se caracterizam por apresentaremdiâmetro entre 125 e 150 µm e zona pelúcida espessa,podendo ter formato arredondado ou oval, embora sejamplanos e não rolem quando manipulados (diferente doembrião). O citoplasma dessa estrutura unicelular podese apresentar degenerado ou fragmentado, parecendo-sevagamente com os blastômeros de uma mórula. O ovócitonão fertilizado geralmente fica retido no oviduto, próximo1 Palestra apresentada na XII Conferência Anual da Associação Brasileira de Médicos Veterinários deEquídeos (Abraveq), realizada em 11 e 12 de junho de 2011 no Royal Palm Plaza Resort, em Campinas (SP).80 mv&z c r m v s p . g o v . b r
Patrick M. McCueDVM, PhD, Diplomate ACTLaboratório de Reprodução EquinaUniversidade do ColoradoFt. Collins, CO 80523à junção ampulo-ístmica (BETTERIDGE, 1989; Weberet al., 1991), e costuma ser encontrado durante o procedimentode lavagem somente quando transportado atravésda junção útero-tubárica junto com um embrião viável(STEFFENHAGEN et al., 1972).Estruturas não embriônicas como debris celulares,cristais de urina, matéria orgânica e outros debris podemeventualmente ser recuperadas durante as tentativas decoletas de embriões. A diferenciação entre tais estruturase um embrião se baseia na presença ou ausência da zonapelúcida, em seu tamanho e em seu formato.Atualmente, empregamos um sistema de graduaçãomodificado baseado em 4 pontos para a avaliaçãode embriões equinos na Universidade do Colorado(MCKINNON et al., 1988; VANDERWALL, 1996). Ascaracterísticas empregadas na determinação do escorede qualidade ou grau são: 1) formato do embrião (esférico,oval, colapsado etc.); 2) espessura da zona pelúcida;Estágio Tamanho (µm) DescriçãoMórula 150 a 200 µmMassa sólida de blastômeros; zona pelúcida espessa; blastômeros inicialmente grandes e passíveisde identificação individual, depois agregados compactos de blastômeros menores; borda externados blastômeros de aparência “serrilhada”; possibilidade de identificação do espaço perivitelínicoentre os blastômeros e a zona pelúcida; rolamento à manipulação (Figura 1).Blastocistoinicial150 a 250 µmZona pelúcida espessa; início da formação da blastocele entre os blastômeros; mínimo espaçoperivitelínico, tamanho semelhante ao da mórula (Figura 2).Blastocisto 150 a 300 µmBlastocele circundada por uma camada de células trofoblásticas; massa celular interna distinta;cápsula evidente entre a camada de trofoblastos e a zona pelúcida; zona pelúcida fina (Figura 3).BlastocistoExpandidoOvócito nãofertilizado(UFO)300 to > 1,000 µm125 a 150 µmBlastocele grande circundada por uma camada fina de células trofoblásticas; células trofoblásticaspequenas e de aparência uniforme; massa celular interna distinta insinuada no interior dablastocele; zona pelúcida ainda presente ou já desaparecida; cápsula aderida ao embrião oulevemente destacada; diâmetro do embrião variável de acordo com a idade (Figura 4).Zona pelúcida espessa; formato oval; plano, não rola à manipulação; membrana celular ecitoplasma podem se apresentar degenerados ou fragmentados (Figura 5).TABELA 1 – Estágios de Desenvolvimento do Embrião Equinoc r m v s p . g o v . b rmv&z81
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