Arrestin hetero/oge Expression/l Mutagenese und biophy,sikalische Untersuchungen

ERGEBNISSE
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3.3.4.
Ausbeuten der verschiedenen Reinigungsverfahren
Die Zellausbeute der Expressionsku1turen lag in etwa bei 1 g Zellen pro Liter Kultur bei einer
OD600 von 1. Durchschnittlich erfolgte die Zellernte nach Uberexpresslon bei einer OD600 von
etwa 6, so daB aus einem Liter Expressionskultur etwa 6 g Zellen gewonnen werden konnten.
In der Tab. 3.2. sind die Proteinausbeuten der verschiedenen Arrestin-Derivate dargestellt.
Tabelle 3.2.:
Klonin 47.7 73.2 72.6 88.1 91.8 0
Fll
Protein MRGS-6ills- Arrestin- Arrestin- Arrestln- Arrestin-
Arrestin 6ills StrepTagIl GST V244C-6ills
p (g) 15,1 43,5 26,0 27,7 17,2
D1 (mg/mi) 1,90 1,85 2,12 3,08 0,90 1,970
D1 (mg) 89,70 227,55 163,90 281,82 51,74
D2 (mg/mi) 0,345 0,405 0,335 0,510 0,430 0,405
D2 (mg) 19,2 44,63 24,03 35,60 14,84
T (mg) 108,9 272,0 187,9 317,4 66,5
T (mg/g) 7,23 6,26 7,22 11,46 3,87 7,210
A (mg) 0,568 1,913 0,614 1,932 0,252 1,056
A (mg/g) 0,038 0,044 0,024 0,069 0,015 0,038
% 0,52 0,70 0,33 0,61 0,38 0,510
G (mg) 273,4 743,8 478,8 487,1 82,7
G (mg/g) 18,1 17,1 18,4 17,6 [4,8] 17,800
P (g):
iil (rug/ml):
iil (rug):
U2 (mg/mI):
U2 (mg):
T (rug):
Gewicht Zellpellet
Proteinkonzentration Uberstand 1
Proteinmenge in Uberstand 1
Prcteinkonzentration Uberstand 2
Proteimnenge in Uberstand 2
Gesamtmenge ltisliches Protein
T (rug/mI) :
A (rug):
A (rug/g):
%:
G (rug):
G(rug/ml):
Gesamtmenge losliches Protein pro g Zellen
Ausbeute in mg Protein pro g Zellen
Ausbeute in mg Protein pro g Zellen
Ausbeute in % von T (mg)
Gesamtzellprotein
Gesamtzellprotein pro g Zellen
Im Durchschnitt lieBen sich etwa 40 J.lg gereinigtes und konzentriertes Protein pro Gramm
Zellen (BFM) isolieren. Dies entspricht in etwa 0,5 % der gesamten loslichen Proteine in den
Uberstanden, Die Menge an isoliertem Protein in den Eluaten vor Umpufferung und
Konzentration wurde nicht ermittelt.